苯丙氨酸定量检测试剂盒-美国DRG国际有限公司.PDF

【产品名称】 通用名：苯丙氨酸定量检测试剂盒（酶法） PhenylalanineKit Enzyme PhenylalanineKit Enzyme 英文名称：PPhheennyyllaallaanniinneeKKiitt（EEnnzzyymmee） 【包装规格】 96人份/盒 480人份/盒 【预期用途】 用于定量检测采集在SS903# 滤纸上的新生儿全血样品中苯丙氨酸的浓度。本试剂盒适用 于新生儿苯丙酮尿症（PKU）的筛查检测。仅用于体外检测。 苯丙酮尿症（简称PKU）是一种较常见的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约 1/10,000。本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子 BH4缺陷引起。这些缺陷 致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中 枢神经系统损害。其临床主要表现为：发育迟 缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性 智力低下等。由于本病的早期发现早期治疗，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此 被我国列为新生儿疾病筛查项 目之一。检测方法还有细菌抑制法、荧光法等。 【检验原理】 采用三氯醋酸（TCA）从干血片中萃取苯丙氨酸。苯丙氨酸被苯丙氨酸脱氢酶转化成苯丙酮 酸 。这个反应伴随着反应混合物中存在的辅酶NAD+减少，生成NADH，这个氧化还原反 应中把添加的四唑盐转化成橙黄色物质Formazane。 Formazane的量与样本中苯丙氨酸的量 成正比。使用酶标仪检测其光密度值，即可换算成其对应的苯丙氨酸浓度值，酶标仪波长使 用450nm。 【主要组成成分】 名称 96人份/盒 480人份/盒 包装 酶稀释液（TritonX-100缓冲液） 11ml/瓶 55ml/瓶 无色透明玻璃瓶或棕色玻璃瓶 底物（四唑盐） 11ml/瓶 55ml/瓶 中和液（碳酸盐缓冲液） 5.5ml/瓶 27.5ml/瓶 三氯醋酸溶液（3%） 17ml/瓶 85ml/瓶 酶（冻干粉） 1瓶（冻干粉） 5瓶（冻干粉） 辅酶（冻干粉） 1瓶（冻干粉） 5瓶（冻干粉） 96孔微孔板 2块 10块 铝箔袋 标准血片S1～S51.1、2.8、5.3、9.6、17.3mg/dl 1份 2份 无色透明塑料袋 质控血片C1：2.2–4.2mg/dl C2：4.6–8.6mg/dl 1份 2份 说明书 1份 质量验证单 1份 注：标准品或质控品的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。 【储存条件及有效期】 储存条件：2℃～8℃，防止冷冻。 有效期：12个月。本试剂为一次性使用，酶和辅酶稀释后即用，剩余不再使用。 【适用机型】 波长450nm（参考波长640nm），美国DYNEX公司CB372型酶标仪. 【样本要求】 遵循卫生部新生儿筛查血斑采集常规，采集并保存新生儿血斑。 【检验方法】 1. 检测前所有的试剂、样本和微孔板条达到室温（18～25°C）； 2. 配制酶和辅酶储存液 分别向酶和辅酶冻干粉瓶内加双蒸水0.5ml，轻摇，避免产生泡沫，稀释后可在2℃～8°C 储存2天。 3. 配制酶和辅酶应用液 另取2只干净的烧杯，分别加入酶和辅酶储存液0.5ml，再各加入酶稀释液5ml，在18℃～ 25°C可保持稳定8小时，在2℃～8°C不能延长稳定性。（若做1/2板，取0.25ml储存液加 酶稀释液2.5ml）。 4. 用打孔器打下直径3mm标准品、质控品、样本血斑放入96微孔板相应微孔中； 5. 每孔加150μl三氯醋酸溶液，室温振荡（300－500U/分）60分钟； 6. 加50μl的中和液到另一块新的微孔板孔中； 7. 吸取130μl的标准品、质控品、样本萃取液到另一微孔板相应的微孔中，轻微振荡； 8. 加50μl的酶应用液到每个孔中； 9. 加50μl的辅酶应用液到每个孔中； 10.在室温（18℃～25°C）下振荡温育60分钟（300转/分）； 11.每孔加100μl底物，混匀，在3～5分钟内读取OD值，酶标仪使用波长450nm（参考波 长640nm）。 12. 结果计算：酶标仪附带软件自动计算样品浓度值。或按照下面方法手工计算： a) 坐标纸上以标准品的荧光值和与其相对应的标准品浓度绘制标准曲线。OD值为纵轴或Y 轴，浓度为横轴或X轴。 b)确定质控品和每个样品的苯丙氨酸浓度值：首先在Y轴上查找OD值，横向延伸至标准曲 线，以标准曲线上的点拉垂直线与X轴相交，得出苯丙氨酸浓度值，判断结果。 c) 计算公式：Y=aX+b