菜豆鲜荚中菜豆凝集素的提取与分离纯化工艺研究-江汉大学期刊社.PDF

第44卷 第6期 江汉大学学报（自然科学版） Vol.44 No.6 2016年12月 J.JianghanUniv.（Nat.Sci.Ed.） Dec. 2016 菜豆鲜荚中菜豆凝集素的提取与分离纯化工艺研究 陈 高，王红波，郭 瑞，代祥德，刘 彤，陈禅友* （江汉大学 生命科学学院；湖北省豆类（蔬菜）植物工程技术研究中心，湖北 武汉 430056） 摘 要：以BeanSaintespritaoeilrouge菜豆鲜荚为试验材料，优化了菜豆凝集素的提取和分离纯化工艺，研究 了提取剂、料液比、pH值和提取时间对菜豆凝集素活性的影响，建立了硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换 层析和Superdex-200凝胶过滤层析的组合方法用于分离纯化菜豆凝集素。研究结果表明：以磷酸盐缓冲溶液 为提取剂，料液比1∶25，pH值6～8，浸提时间8h，菜豆植物凝集素的提取效果适宜。菜豆凝集素浸提液经硫 酸铵分级沉淀，DEAE-52阴离子交换层析，Superdex-200凝胶过滤层析，冷冻干燥后可获得纯度较高的菜豆凝 集素。纯化的样品经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测为单一条带，血凝法检测有血凝活性。 关键词：菜豆；凝集素；分离纯化；血凝活性 中图分类号：R282.71；S643.1 文献标志码：A 文章编号：1673-0143（2016）06-0496-08 DOI：10.16389/j.cnki.cn42-1737/n.2016.06.003 Extraction，SeparationandPurificationofPh seolusvulg ris Agglutinin （PHA）fromCommonBeanFreshPods CHENGao，WANGHongbo，GUORui，DAIXiangde，LIUTong，CHENChanyou* （SchoolofLifeSciences，JianghanUniversity；HubeiProvinceEngineeringResearchCenterforLegumePlants，Wuhan430056， Hubei，China） Abstract：Inthispaper，theprocessesofextraction，separationandpurificationof Phaseolusvulgaris agglutinin （PHA）fromthecommonbeanBeanSaintespritaoeilrougefreshpods wereoptimized. Theeffectsofextractingagent，material-liquidratio，pHandextractingtimeonPHAwerestudied， and the combined method of ammonium sulfate precipitation，DEAE- 52 anion exchange chromatographyandSuperdex-200 gelfiltrationchromatographyforextracting，isolatingandpurifing thePHAfromfreshpodsofcommonbeanhasbeenestablished.Themainresultswereasfollow：1）The optimizedtechnicalparametersforcommonbeanextractionprocesswerematerial-liquidratio 1∶25， pH 6-8，extractingtime 8 h，PBSasextractingagent；2）ThehighpurityPHAwasobtainedwith ammoniumsulfateprecipitation，dialysis，DEAE-52anionexchangechromatography，concentratedby ultrafiltrati