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首次发现：通过基因敲除可消除活组织中的 衰老细胞 原创2017-06-28 订阅号 APExBIO 细胞衰老是细胞周期停滞的永久状态，其保护有机体免受肿瘤发生，并在损伤和组 织重塑期间调节组织完整性。然而，衰老期间衰老细胞在组织中的积累导致与年龄 有关的病理反应。因此，需要更深入地了解调节衰老细胞生存力的机制。在这里， 来自魏茨曼科学研究所的一篇研究显示 CDK 抑制因子 p21 （CDKN1A）维持DNA 损伤 诱导的衰老细胞的活力。在 p21 沉默后，衰老细胞获得多个 DNA 损伤，从而激活 ATM 和 NF- κB激酶，导致细胞存活率降低。NF- κB活化诱导 TNF- α分泌和 JNK 活化， 以 caspase 和 JNK 依赖性方式介导衰老细胞的死亡。值得注意的是，p21 敲除小鼠 消除了衰老的肝星状细胞，减少了肝纤维化和胶原蛋白的产生。这些发现确定了调 控衰老细胞活力和纤维化的新机制。 细胞衰老（Cellular senescence），是细胞周期停滞的永久形式，对各种应激源 包括端粒缩短，致癌基因激活和 DNA 损伤等作出反应来停止细胞增殖。细胞衰老 在短期损伤后的组织稳态中起着重要作用，促进肝脏损伤后的组织修复，皮肤纤 维化和伤口愈合过程中的组织修复。 衰老细胞表现出升高的衰老相关 β-半乳糖苷酶（SA- β-gal）活性和持续的DNA 损伤反应，使其与其它非增殖细胞群区分开。衰老细胞产生多种特征性分泌因子， 统称为衰老相关分泌表型（SASP），其以自分泌的方式加强衰老停滞并介导衰老 细胞的免疫监视。然而，随着衰老，衰老细胞在生物体中积累并促进局部炎症， 其以细胞非自主的方式驱动组织衰老，组织破坏以及潜在的肿瘤发生和转移。 衰老程序由信号通路的复杂相互作用驱动。如利用 p16INK4A （CDKN2A）和 p53 （TP53）靶向p21 （CDKN1A），抑制细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs），从而抑 制增殖相关基因的表达。另外， NF- κB作为 SASP 的主调节剂，影响衰老细胞的 微环境和它们的免疫监视。通过免疫系统清除衰老细胞是限制其在组织中长期积 累的必要条件，在组织中长期积累可能源自衰老细胞对凋亡的固有抗性。 驱动衰老的机制已经被广泛研究，但使其长期积累在组织中的机制尚不清楚。最 近，有研究显示抗凋亡 BCL-2 家族成员 BCL-W，BCL-XL 和 BCL-2 促进衰老细胞对 凋亡的抗性。 然而，调控衰老细胞对细胞死亡的抗性的通路尚未确定。一方面， 衰老细胞不能将 p53 蛋白积累至凋亡所需的水平。另一方面，p53 靶向 p21，通过 其促进细胞周期抑制，从而保护细胞免受凋亡。 这种作用可能由促凋亡蛋白 BAX 的 p53 依赖性和不依赖性上调，或通过激活肿瘤坏死因子（TNF- α）或影响 DNA 修复来调控。 因此，本文中，作者开始探讨p21 如何调控 DNA 损伤后衰老细胞的生存力。 作者用 DNA 损伤剂依托泊苷（ “DNA损伤诱导的衰老”，DIS）处理正常人肺成纤 维细胞（IMR-90）来诱导衰老。发现诱导的衰老细胞的细胞周期停滞，衰老标记 物 p16，p21，p53 和衰老相关的 β-半乳糖苷酶（SA- β-gal）表达。p21 的沉默 降低了 DIS 细胞的生存力。同样，用依托泊苷诱导人肺癌H1299 细胞的衰老，同 样，p21 的沉默降低了细胞的生存力。 在人皮肤成纤维细胞中转染 p21 siRNA，并进行 RNA 测序分析。发现 DIS 细胞中 p21 沉默后，细胞周期调节因子，转化生长因子- β （TGF- β），DNA 损伤反应和 局灶粘连信号通路发生了变化。如 COL1A1 表达降低，细胞周期调节因子 CDK-1 和 cyclin A2 的表达升高，TNF- α和 Smad-7 表达升高（TNF- α和 Smad-7 负向调节 TGF- β）。 为了探究衰老细胞的死亡诱导机制，测试了涉及 DNA 损伤反应（DDR）蛋白质的磷 酸化水平：共济失调毛细血管扩张症突变基因（ATM），CHK2，γH2AX，和 P53。 免疫印迹结果显示p21沉默的DIS细胞中所有这些蛋白质的磷酸化水平显著增加。 单细胞凝胶电泳发现 p21 的沉默导致DIS 细胞中 DDR 增强。DDR 的增强伴随着ATM 的激活增加，驱动NF- κB通过 TNF- α/ TNFR1信号通路激活 JNK。 p53 和 E2F 参与凋亡的诱导，p53 或 pRb