替米考星和泰乐菌素对一氧化氮和前列腺素E2合成的抑制作用研究.pdfVIP

替米考星和泰乐菌素对一氧化氮和前列腺素E。 合成的抑制作用 曹兴元沈建忠昊聪明江海洋李炳玉 (中国农业走学动物医学院北京100094) 摘要：替米考星是近期开发的兽用大环内酯类抗生素，为泰乐茵素的衍生物。有关研究显示 替米考星可能通过非抗茵活性的免疫调节作用发挥疗效。本文通过构建的细菌脂多糖(LPS)诱导 构建的体外炎症模型，研究了不同浓度替米考星和泰乐茵素对No和PGE：合成的影响。结果显示 NO和PGE：，而5ug／mL浓度的替米考星和泰乐菌素均无调节作用。结论：替米考星和泰乐茵素可 能在转录和翻译水平通过调节致炎因子的合成而发挥抗炎作用。 关键词：替来考星；泰乐茵素；一氧化氮；前列腺素E：；巨噬细胞 在炎症的急性相反应中，巨噬细胞起着重要的调控作用，当被病原微生物和内毒素激活后，巨 这两种致炎因子的调控可以有效控制炎症的发展。 替米考星是半合成大环内酯类抗生素。为泰乐菌素的衍生物，目前广泛用于治疗牛Il,21，羊【31和 猪141的呼吸道疾病以及反刍动物的乳房炎p】。替米考星的临床疗效归于其较好的药代动力学特征16,71 和对相关病原较低的MIC值p’j。目前有证据显示替米考星可能通过非抗菌活性的免疫调节机制来发 挥抗炎作用，例如促进中性粒细胞的凋亡Itoq21和抑制肺泡巨噬细胞分泌PGE2D3I。对人用的人环内 酯类抗生素的研究也发现．红霉索通过抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的转录而抑制肺泡 米考星和泰乐菌素也都属丁大环内酯类抗生素，到目前为止。尚未见两种药物对NO幕IPGE，调节作 了替米考星和泰乐菌素是否对NO和PGE2具有调节作用。 1、材料与方法 1．1细胞小鼠RAW264．7单核．巨噬细胞系购白协和医科人学细胞中心。 1．2药品和试剂替米考星碱标准品购白Roche公司，泰乐菌素碱标准品购自中国兽医药品监察所。 菌脂多糖(LPS)及其它试剂均购自美国sigma公司。 1．3细胞培养细胞在含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基中培养，传代后接种于24：：J：L培养板中。共 分为三组，空白对照组(无药物和LPS处理)、LPs处理阳性对照组(LPSIug／mL处理18m、替米考 行。 1．4 ll”建立的方法检测。 1．5诱导型一氧化氨合酶的活性检测细胞总蛋白的提取方法参照Xie等Ils】进行。收集培养细胞，加 入预冷的40mM Tris．HCI缓冲液(pH8．0)(含有lp#mL丝氩酸蛋向酶抑制荆，5me／mE胃蛋白酶 raMPMSF)，经过三个液氮．冰水浴循环裂解细胞。将细胞裂解液12000 抑制剂，51．tg／mL抑肽酶有llOO ×g离心2 次加入新鲜配制的NADPH、硝酸还原酶、FAD、BH4和乳酸脱氢酶溶液，然后按照1．4的步骤进行 NO的测定。． 1．6蛋白质印迹蛋白提取按上一步骤进行。按每条泳道加总蛋白50ug进行十二烷基磺酸钠．聚丙烯 酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)，经电转印转移到硝酸纤维素滤膜上。加入兔抗小鼠iNOS多克隆抗体， 稀释度为1：700，4C，孵育20 h。然后加入碱性磷酸酶标记的羊抗兔lgG，室温孵育2h。经洗涤后， NBT-BCIP显色。图像分析仪测定各条带的光密度值(OD)作定鼙分析。 TGA TACCCGGAC CTCAGG 为：上游：5’一GTG CTG T-3’．’卜-谢!：5’一CCG TGTTGCACG GCTCAGACAG TCCG一3’，均由上海生物。r程公司合成。反麻条件分别为：iNOS}11COX．2： ℃．1分钟；72℃。5分钟，30个循环。iNOS、COX-2}lll3-actin的扩增产物分别为897 bp，689bp}11430 bp。经1％琼脂糖凝胶电泳，利州AlphaEaseFc凝胶分析系统(美国A