日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析研究.pdfVIP

中国人兽共 患病学报 122 ChineseJournalofZoonoses 2O13，29 (2) DOI：103969／cjz．j．issn．1002—2694．2013．02．004 日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析 洪 炀 ，李学珍 ～，傅志强 ，石耀军 ，陆 珂 ，杨健美 ，朱传刚 ，苑纯秀 ，李 浩 ，李祥瑞 ，林矫矫 摘 要 ：目的 克隆、表达 日本血吸虫线粒体外膜转运酶 34基 因(sjTOM34)，并对其生物特性进行初步研究。方法 应 用 RT—PCR方法从 42d日本血吸虫成虫cDNA 中扩增 SjTOM34基因，并进行生物信息学分析。应用实时定量 RT—PCR方 法分析 了SjTOM34基因在 日本血吸虫不同发育阶段虫体 中的表达状况。构建 了SjTOM34基 因重组原核表达质粒，并在大 肠杆菌 中进行表达 ，Westernblotting分析 了重组抗原的免疫原性及该蛋 白在不 同发育阶段虫体 中的表达情况 ，利用免疫组化 方法观察 了该蛋 白在虫体 内的分布情况 。结果 获得 了sjTOM34的基 因序列，其开放阅读框(ORF)为 1083bp。该基 因在 所检测 的不 同发育阶段童虫和成虫中均有表达 ，其 中在 35d虫体 中的表达量略高于其他时期的虫体。成功构建 了重组的原 核表达质粒并且在大肠杆菌中获得表达 ，重组蛋 白在上清和沉淀 中都有存在 ，并且具有较好 的免疫原性，在所检测 的各时期 虫体 中均可检测到该蛋 白的存在 ，并且主要分布在虫体的实质组织 中。结论 获得 了 日本血吸-4SjTOM34基 因，初步明确 了该基 因在 日本血吸虫童虫和成虫中的表达情况 ，及在成虫中的分布。 关键词 ：日本血吸虫；线粒体外膜转运酶 34；克隆；表达 ；免疫定位 中图分类号 ：R383．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1002—2694(2013)02—0122—07 Cloning，expressionandcharacterizationofageneencodingtranslocase oftheoutermitochondrialmembrane34 (TOM 34) inSchistosomajaponicum HONGYang ，LIXue—zhen 。，FU Zhi—qiang ，SHIYao—jun ，LU Ke，YANGJian—mei， ZHU Chuan—gang ，YUANChun—xiu ，LIHao ，LIXiang—rui。，LINJiao—jiao (1．ShanghaiVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences／KeyLaboratory rAnimalParasitology，MinistryofAgriculture，Shanghai200241，China； 2．CollegeofVeterinaryMedicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China) ABSTRACT：A full—lengthcDNA encodingtheSchistosomajaponicum translocaseofoutermitochondrialmembrane34 (SjTOM34)wasfirstisolatedfrom42一dayschistosomecDNAs．ThecDNAhadanopenreadingframe(ORF)of1083bpand encoded360aminoacids．RealtimequantitativeRTPCRanalysisrevealedthattheexpressionofSjTOM34wasalittlehigher in35一dayschistosomesthanwormsinotherstage．TheSjTOM34wassubclonedintopET28(+)andexpressedasboth