利用smart技术构建锯缘青蟹精巢和卵巢的cdna文库.pdfVIP

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2018-08-19 发布于天津
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利用smart技术构建锯缘青蟹精巢和卵巢的cdna文库

第 43 卷　第 4 期 ( ) Vol. 43 　No. 4 厦门大学学报自然科学版　2004 年 7 月 Journal of Xiamen University (Natural Science) J ul. 2004 　文章编号 (2004) 利用 SMAR T 技术构建锯缘青蟹精巢和卵巢的 cDNA 文库 1 3 2 1 贾锡伟 ,王艺磊 ,张子平 ,李少菁 ( 　　　　　　　 1. 厦门大学海洋与环境学院 ,福建厦门 361005 ; 　2. 美国密歇根州立大学水产与野生生物学系美国; 　3. 集美大学水产学院 ,水产生物技术研究所 ,福建厦门 361021) ( ) 摘要 : 采用 RDP 试剂改进自Chomczynski and Sacchi 1987 提取锯缘青蟹精巢和卵巢的总 RNA , 经oligotex 试剂盒纯化得到 mRNA. 利用 SMART ( switching mechanism at 5 ’end of RNA transcript ) 技术 ,构建成精巢和卵巢的全长 cDNA 文库. 在构建好的文库中 ,精巢的文库含有约 1. 45 ×106 的重组子 ,卵巢的文库含有约为 1. 75 ×106 的重组子. 插入 cDNA 长度为 500 bp ～3 kb ,说明两文库均具有良好的质量 ,为进一步筛选、克隆精巢与卵巢特异表达基因奠定了基础. ( ) 关键词 : cDNA 文库 ; 精巢 ; 卵巢 ; 锯缘青蟹 Scylla serrata 中图分类号 : Q 78 文献标识码 :A 　　　　　　　　　　　　　　　 ( ) 　　锯缘青蟹 Scylla serrata 是我国南方重要的养 TA TGGCCGGG3 ’, CDS Ⅲ/ 3 ’PCR 引物 : 5 ’ 殖蟹类 ,其精巢和卵巢的结构与功能 ,精子和卵子的 A TTCTA GA GGCCGA GGCGGCCGACA TGd ( T ) 结构、发生等在细胞水平已有许多研究[1～4 ] ,但是 , ( ) 30N - 1N3 ’N = A , G ,C ,or T ;N - 1 = A , G ,or C . 5 ’ 其基因水平的相关研究迄今未见报道. 因此 ,我们用 PCR 引物 : 5 ’AA GCA GTGGTA T SMART 技术构建了锯缘青蟹的全长 cDNA 文库 , λ CAACGCA GA GT