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IGEM PKU Count Group 分子实验基本操作培训 余涛，郑勤思 2008-4-13 Outline 分子实验基本流程介绍 分子实验基本操作的原理、步骤及注意事项 总结 分子实验基本流程介绍 感受态的制备 PCR克隆目的片断 酶切及酶切片断回收（电泳） 连接 小提质粒并酶切鉴定（电泳） 大肠杆菌的培养 转化 分子实验基本流程介绍 感受态的制备 PCR克隆目的片断 酶切及酶切片断回收（电泳） 转化 连接 小提质粒并酶切鉴定（电泳） 大肠杆菌的培养 分子实验基本操作——大肠杆菌的培养 原理 大肠杆菌在37 ℃下在较好较快的进行增殖， 4 ℃下则可较好停止代谢，便于保存。（长期保存应在-80 ℃ 用15-20%甘油冻存） 由于转入的质粒带有抗性标记，用带有抗生素的培养基即可进行选择性培养。 分为固体培养基培养和液体培养基培养 分子实验基本操作——大肠杆菌的培养 Step0: LB培养基的配制(1L培养基含) 10g Tryptone 5g Yeast Extract 10g NaCl 15g Agar (仅在固体培养基中加入，注意琼脂为Agar琼脂糖/Agarose区分) 1L 去离子水 一般一瓶配100-300mL Step0’: 灭菌（