发酵液中泰乐菌素测定方法的研究.doc

Ξ 发酵液中泰乐菌素测定方法的研究 戚 薇 王建玲 韩英素 杜连祥 ( 食品工程系) 摘要: 对发酵液中泰乐菌素含量的两种测定方法 ( 即薄层层析法和高效液相色谱法) 进行了比 较研究, 结果表明, 这两种方法都具有较好的分离效果和较高的回收率, 回收率分别为 95. 9% 和 90. 3% 。说明除了高效液相色谱法外, 薄层层析法是一种简易又实用的测定方法。 关键词: 泰乐菌素 回收率 薄层层析 高效液相色谱 STUDY O N THE M ETHOD S O F D ETERM INA T IO N O F TYL S IN IN THE FERM ENTED BRO TH Q iW e i W an g J ian l in g Han Y in g su D u L ian x ian g A bstrac t: A com p a r iso n study fo r de te rm ina t io n o f ty lo sin co n ten t w ith th e TL C m e tho d and th e H PL C m e tho d h a s been ca r r ied o u t. It w a s fo und th a t th e tw o m e tho d s h ad goo d sep e ra t io n effec t and h igh reco ve ry. T h e reco ve ry o b ta ined by th e TL C m e tho d w a s h igh e r th an th a t by th e H PL C m e tho d. T h ey w e re 95. 9% and 90. 3% , re sp ec t ive ly. T h e re su lt s show ed th a t be side s th e H PL C m e tho d, th e TL C m e tho d w a s sim p le and p rac t ica l fo r quan t ita t ive e st im a t ing ty lo sin in th e fe rm en ted b ro th. Key words : T y lo sin , R eco ve ry, TL C , H PL C 泰乐菌素( ty lo sin ) 是弗氏链霉菌产生的一种大环内酯类抗生素。 自 80 年代开始, 泰乐 菌素在国际上被广泛地用作禽畜专用的抗菌促生剂, 对治疗禽畜的支原体疾病和革兰氏阳 性菌的感染、促禽畜生长、降低死亡率、提高饲料转化率有明显的作用。 目前, 国外以泰乐菌 素为原料, 已生产出疗效更高的新一代产品—32乙酰24 2异戊酰泰乐菌素 (A IV ) , 对治疗大 环内酯类抗性菌株的感染有更好的疗效1 。 泰乐菌素含量的测定方法有生物法和化学法2 。生物法有浊度法和纸片扩散法。生物法 测得的是发酵液中各种泰乐菌素结构类似物的抗菌总效价, 测定周期长, 工作量大。 而化学 法不仅可测定发酵液中泰乐菌素单一组分的效价, 而且测定方法快速, 简便。 常用的化学法 有薄层层析法(TL C ) 和高压液相色谱法 (H PL C ) 3 , 本文对这两种方法进行了比较研究。 材料和方法 1 1. 1 试剂 泰乐菌素标准样: 日本进口; (2) 乙酸乙酯: 天津化学试剂一厂; (3) 甲醇: 天??? (1) 化学试剂一厂; (4) 团。 1. 2 仪器 乙腈: 天津化学试剂二厂; ( 5) GF 254 硅胶 ( 60 型) : 青岛海洋化工集 L C - 3A 日本岛津高效液相色谱仪; ( 2) 756- 紫外可见分光光度计; ( 3) 台式 (1) 高速离心机 1. 3 方法 (1) 薄层层析法: 取 1 mL 发酵液与 1 mL 0. 1 m o l?L N a3 PO 4 溶液 (pH 9. 0) 混合, 再加 入 2 mL 乙酸乙酯, 充分混匀进行萃取, 然后离心分离。 取乙酸乙酯层 ( 10～ 20) ΛL 点样于 GF 254 薄板上, 进行层析。流动相为乙酸乙酯- 二乙胺 (95+ 5)。层析后风干, 在紫外灯下观 察, 将含斑点的硅胶刮下, 置离心管中, 加入 4 mL 甲醇, 振荡后离心, 取上清液在 283 nm 测 定吸光度。 将相同大小的空白硅胶刮下, 加入 4 mL 甲醇中, 离心得到的甲醇液作为空白。 (2) 高压液相色谱法: 取 1 mL 发酵液, 用 85% 的甲醇溶液定容至 10 mL ,