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第一编 生物大分子结构与功能 第一章 蛋白质的结构与功能 第二章 核酸的结构与功能 第三章 酶 第 一 章  蛋白质的结构与功能Structure and Function of Protein 第一节 蛋白质的分子组成 第二节 蛋白质的分子结构 第三节 蛋白质的结构与功能的关系 第四节 蛋白质的理化性质 第五节 蛋白质的分离、纯化与结构分析 Protein —— 来自希腊字母，意思是“头等重要的，原始的” 蛋白质 —— 来源于对蛋清（清蛋白）的研究 一、什么是蛋白质? 蛋白质(protein)是由活细胞合成的氨基酸(amino acids) 组成的高分子量多肽。 蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。 RNase 蛋白质研究的历史 蛋白质的生物学重要性 分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。 含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45％，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80％。 蛋白质占干重 人体中（中年人） 人体 45% 水55% 细菌 50%~80% 蛋白质19% 真菌 14%~52% 脂肪19% 酵母菌 14%~50% 糖类＜1% 白地菌50% 无机盐7% 代谢调节作用 运动与支持作用 机体的结构蛋白：头发、骨骼、牙齿、肌肉等 参与细胞间信息传递 3. 氧化供能 蛋 白 质 的 分 子 组 成The Molecular Component of Protein 元素组成和分子量 元素周期表：109种 人工元素：93－109号 天然元素：92种 生物体内：81种 一、氨基酸 —— 组成蛋白质的基本单位 存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种。 除脯氨酸外，其他均具有如下结构通式。 D-氨基酸 微生物 哺乳动物脑组织 3. 羟脯氨酸-- Pro羟化 4. 羟赖氨酸---Lys羟化 医学营养学上将20种氨基酸分为: 8种营养必需氨基酸 12种营养非必需氨基酸 三、氨基酸的重要理化性质 1. 物理性质：无色结晶 羧基的电离度氨基 中性氨基酸的pI7 酸性氨基酸的pI7 碱性氨基酸的pI7 pH=pI pHpI pHpI 应用： 电泳分离蛋白质 (四)氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应（sanger反应） 首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构。 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽。 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸。 C.分离DNP-氨基酸。 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目。 反应特点: A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 虽然多肽侧链上的ε- NH2、酚羟基也能与DNFB反应，但其生成物，容易与α- DNP氨基酸区分和分离 (五)氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应） Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同，但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定。 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍。 可用于微量氨基酸的定量。 用Edman降解法提供逐次减少一个残基的肽链。 灵敏度提高，能连续测定。 多肽顺序自动分析仪 样品最低用量可在5pmol 成肽反应 (八)侧链基团（R）参加的反应 酪氨酸的酚基 组氨酸的咪唑基 精氨酸的胍基 色氨酸的吲哚基 蛋氨酸的甲硫基 半胱氨酸的巯基 四、蛋白质是由许多氨基酸残基组成的多肽链 （二）体内存在多种重要的生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有重要的功能： （1）解毒功能：与重金属离子、环氧化物（致癌物）结合排出体外。 （2）维持红细胞膜的完整性。 蚕豆