重组变形链球菌表面蛋白PAc发酵工艺研究.pdfVIP

上海 口腔医学 2011年 1O月 第 20卷 第 5期 ShanghaiJournalofStomatologyVo1．20No．5October，2011 ·459· [文章编号]1006—7248(2011)050459—05 重组变形链球菌表面蛋白PAc发酵工艺研究 金洁 1,2，李宇红 ，樊明文z (1．杭州13腔医院 牙体牙髓病科 ，浙江 杭州 310006； 2．武汉大学 口腔生物医学工程教育部重点实验室．湖北 武汉 430079) 摘【要】目的：研究表达重组变形链球菌表面蛋白(rPAc)的工程菌pET20b(+)一AP／BL21(DE3)plysS的发酵条件。方法：通 过摇瓶培养 ，进行发酵条件优化 在 5L发酵罐 中发酵 pET20b(+)一AP／BL21fDE3)plysS工程菌，并对发酵产物进行 SDS—PAGE、Western印迹分析鉴定。结果：确立了pET20b(+)一AP／BL21(DE3)plysS工程菌的高密度发酵工艺．即LB一2 培养基 ，初始 pH值为 7．2，溶氧控制为 30％以上 ，补料为 10％甘油、5％酵母粉和 5％蛋 白胨 。目的蛋 白呈可溶性表达 ． 表达量 占菌体总蛋 白的45％以上 。菌体密度达到 44。Western印迹分析显示 ，rPAc蛋 白和抗 PAc抗体有 良好 的结合 活性 结论 ：通过发酵工艺优化 ，提高了rPAc蛋 白的可溶性表达量 ，为进一步规模化研究和生产奠定了基础 [关键词】发酵 ；纯化 ；发酵优化 『中图分类号1R781．1 f文献标志码1A StudyonthefermentationconditionsofrecombinantStreptococcusmutanssurfaceprotein JINJie ，LIYu—hong， FANMing-wen。． ．DepartmentofOperativeDentistryandEndodontics，StomatologicalHospitalofHangzhou．Hangzhou 3looo6，Zhel】iangProvince2．KeyLaboratoryforOralBiomedicalEn~neeringofMin~tUofEducation，WuhanUniversity． Wuhan430079,HubeiProvince，China) [Abstract】PURPOSE：TodevelopthebestfermentationprocessonpET20b (+)一AP／BL21 (DE3)plysSexpressing recombinantStreptococcusmutartssurfaceprotein (rPAc)．METHODS：Thestrainswereactivatedandthenculturedin orbitalshakers．Pilottestofflask shakingculturewasdonetogetoptimized cultureconditions，includingpH valuefor culture，type ofculture medium，range of culture volume and type offeeding medium．According to the optimal fermentationconditionofflaskshakingculture，femr entationwascarriedoutwith5Lfermentor．Thefemr entationproducts wereanalyzedbySDS—PAGE andWesternblot．1iESULTS：Theoptimum conditionsoffermentationswereasfollows： initialpH 7．2，LB-2 culturemedium ，thedissolvedoxygen concentrationmaintained