色谱技术在药物分析的应用 反相HPLC在药物分析中的应用.ppt

广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 反相HPLC在药物分析中的应用 （成都 ● 2010/09） 曾伟杰 leo@ technic@ 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd ● 方法开发前要确定的基本问题 ● 色谱柱的选择 ● 流动相的选择 ● 样品前处理的新方法 ● 色谱柱使用维护的建议 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd ● 方法开发前要确定的基本问题 1、分析物的物理、化学性质 样品基质----决定前处理方法 溶解性----决定正、反相方法 酸碱性----确定色谱柱类型、流动相组成 pKa----确定流动相的pH值 化学结构、特征官能团、Etc. 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd ● 方法开发前要确定的基本问题 2、混合分析物的主要差异 疏水性差异----用疏水性选择性强的色谱柱 极性差异----用具有极性选择性的色谱柱 芳香性差异----用芳香选择性色谱柱 混合差异----用多种选择型色谱柱 分子量差异----GPC、GFC 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd ● 方法开发前要确定的基本问题 3、选用何种分析方法 HPLC-UV HPLC-IR HPLC-MS HPLC-ELSD Etc. 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd ● 色谱柱的选择 1、色谱柱的基本技术参数 固定相----决定选择性 硅胶纯度（金属含量）----影响峰形 粒径----影响柱效、柱压 碳载量----影响保留时间 孔径----孔径大，比表面积小 比表面积----影响载样量 pH范围-----决定灵活性 封尾基团----影响峰形、保留 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 硅胶纯度（金属含量） Columns: A型硅胶 ( = 旧型号) B型硅胶 (Gemini? 5μm C18) Mobile phase: 10mM 甲酸铵 pH 3.5 : 乙腈: 甲醇（ 35:15:50 ） Flow rate: 1.0 mL/min Components: 1.Rhodamine 123 2. Rhodamine 6G 3. Rhodamine B Base 玫瑰精, 若丹明(一种红色荧光染料) 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 色谱图 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 金属的影响（1） 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 金属的影响（2） 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd Phenomenex 典型B型硅胶色谱柱 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 2、疏水选择性色谱柱 ---广泛应用于各类药物分析 经典C18----Luna C18 Gemini C18(pH 1~12) 其他： C12、C8、C6、C5、C4 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrumen