姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MicroRNA表达谱的分析.docVIP

精品论文 参考文献 姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MicroRNA表达谱的分析 李强 王斌生（通讯作者） 柴琛 　　（兰州大学第一医院 甘肃 兰州 730000） 　　【摘要】 目的：研究姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MicroRNA表达谱的变化和在致凋亡中的作用，为临床使用姜黄素治疗胃癌提供理论依据。方法：将BGC823和SGC7901两种胃癌细胞系分别培养于含10%胎牛血清、1000U/ml青链霉素的RIMP1640培养基，分别采用DMSO，10uM，50uM姜黄素进行感染处理48小时后采用流式细胞术对各组细胞凋亡情况进行检测，同时采用miRNA芯片技术检测miRNA的表达，筛选表达差异miRNA，进行层次聚类分析。结果随着姜黄素作用浓度的升高，BGC823和SGC7901两株胃癌细胞株的凋亡率逐渐上升，两种细胞株50uM姜黄素处理组凋亡率较10uM组升高约3倍左右，与对照组相比，姜黄素处理组凋亡率明显升高，P均小于0.01。MicroRNA芯片分析显示在初步筛选出的129条MicroRNA中，与10uM姜黄素处理组相比，50uM姜黄素处理组表达差异在2倍以上的MicroRNA共计6条，上调表达MicroRNA2条，分别为miR-150和miR-34a；下调表达MicroRNA共计4条，分别为miR-92b、miR-650、miR-9和miR-125b。结论：姜黄素诱导可使胃癌细胞系BGC823和SGC7901的MicroRNA表达谱发生变化，提示某些MicroRNA可能参与了姜黄素所致胃癌细胞凋亡。 　　【关键词】 姜黄素；胃癌；MicroRNA；表达谱 　　【中图分类号】R735.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）17-0160-03 　　胃癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一，我国胃癌的发病率高居所有癌症发病率之首，严重威胁着人们的健康和经济水平。目前对于胃癌的治疗仍以手术治疗为主，但仍有相当一部分胃癌患者不具有手术指症需要化疗，或手术患者术后长期的化疗对于患者的远期毒性损伤较大[1]。中国传统中药姜黄素(curcumin,Cur)是一种从姜黄、莪术等姜黄属植物的根茎中提取出来的脂溶性酚类色素，作为一种天然安全的添加剂和染色剂广泛应用于食品工业之中[2]。研究表明姜黄素是一种具有多种生物活性的中药单体，能够杀伤多种肿瘤细胞[3]。微小RNA(microRNA,miRNA)是细胞内高度保守的非编码RNA，参与了包括肿瘤在内的多个病理生理过程[4]。有研究表明姜黄素可能通过调控miRNA机制发挥抗癌作用[5]。因此本研究通过研究miRNA在姜黄素致胃癌细胞凋亡中的作用和相关机制研究，为临床中药治疗胃癌提供基础理论依据。 　　1.材料与方法 　　1.1 细胞株及试剂 　　胃癌细胞系采用BGC823和SGC7901两株。姜黄素购自陕西听泰生物科技发展有限公司，分子式：C21H20O6，分子量：368.37，纯度99%，用DMSO配成1mol/L的原液，-20℃冻存备用。 　　1.2 细胞培养 　　将BGC823和SGC7901细胞分别培养于含10%胎牛血清、1000U/ml青链霉素的RIMP1640培养基，放置于37℃，5% CO2的恒温细胞培养箱内，每2～3d更换培养液待细胞融合大于80%后使用胰蛋白酶消化细胞，种板培养或传代。待细胞稳定后分别将BGC823和SGC7901细胞以105/ml密度接种于96孔板中，加入200mu;ＬRIMP1640完全培养液，加入不同浓度姜黄素（10mu;M、50mu;M）处理。 　　1.4 细胞凋亡检测 　　姜黄素作用48h后收取各组细胞，PBS洗2次，离心机800r/min，离心5min，弃上清。加入195mu;L AnnexinV-FITC结合液重悬细胞。加入5mu;L Annexin V-FITC，轻轻混匀，室温避光孵育10分钟。800r/min离心5min，弃上清，加入190mu;L Annexin V-FITC结合液重悬细胞。加入10mu;L PI染色液，轻轻混匀，冰浴避光孵育。流式细胞仪检测。 　　1.5 MicroRNA芯片分析 　　两种细胞系对照组，10uM和50uM处理组各收集1times;108细胞，分别加入1mLTrizol抽提RNA，经纯度检测后送康成生物工程有限公司进行MicroRNA芯片分析。原始数据获得后首先去除背景值后进行归一化分析。筛选与凋亡相关MicroRNA的表达谱。 　　1.6 统计学分析采用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数plusmn;标准差表示，凋亡相关MicroRNA分析以与空白对照组相比，10uM姜黄素处理组表达差异在2倍以上