如何定量测量水溶性蛋白.docVIP

如何定量测量水溶性蛋白? 水溶性蛋白定量测量方法，一般豆粕3-7%左右，棉粕菜粕2-6%,DDG7-10%,秘鲁鱼粉在22%左右，巴拿马鱼粉和国产蒸汽鱼粉在16%左右,全鸡肉粉7%左右(可能是脂肪的原因所以有点偏低)（占粗蛋白的比例）。 定量测量水溶性蛋白方法如下： 　　1、 称样2g左右，精确到0.0001g,放到三角瓶中。 　　2、 加蒸馏水200ml 　　3、 震荡30分钟 　　4、 过滤 　　5、 取虑液25ml，加催化剂2g，加浓硫酸10ml，消化（空白用25ml蒸馏水代替滤液） 　　6、 以下同测粗蛋白方法 标准：一般豆粕3-7%左右，棉粕菜粕2-6%,DDG7-10%,秘鲁鱼粉在22%左右，巴拿马鱼粉和国产蒸汽鱼粉在16%左右,全鸡肉粉7%左右(可能是脂肪的原因所以有点偏低)（占粗蛋白的比例）。 本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。?1仪器和用具? 1.1凯氏烧瓶：50m1；?1.2圆底烧瓶：100m1；?1.3万用电炉；? 1.4锥形烧瓶：100m1；? 1.5微量滴定管：5ml、刻度0．01m1；?1.6容量瓶：50m1；?1.7移液管：5m1；?1.8量筒：10ml；?1.9洗耳球：? 1.10凯氏微量蒸馏装置(见下图)、胶管等。? ? 凯氏微量蒸馏装置图? ????1、蒸馏瓶；2、冷凝管；3、承接瓶；4、回流管；5、漏斗；?????6、活塞；7、簧夹；8、烧瓶?2试剂? 2.1浓硫酸过氧化氢水混合液(2：1：3)：在t00vtl水中缓慢加入浓硫酸? 200ml，冷却后再国入30％过氧化氢300ml，混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月；? 2.2混合催化剂：硫酸铜(cuso4·5H20)10g，硫酸钾(A．R)100g，硒粉0.2g，?在研钵中研细使通过40目筛，混匀后备用；?2.3?40％氢氧化钠溶液；?2.4?2％硼酸溶液； 2.5?O．01N盐酸溶液；? 2.6??甲基红乙醇溶液：0.1g甲基红溶于75ml?95％乙醇中(先在研钵中加乙醇?研磨)；? 2.7次甲基蓝乙醇溶液：0.1g次甲基蓝溶于80m195％~．醇中。临用时将以上?两液按2：1比例混合即成。在酸域呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈?绿色。?3操作方法?3.1消化? ????按照含有10～30mg粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.2～0．3g(w，?精确到0.?0001g)，用蜡光纸卷着倒入50nnl凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g，同?时加入硫酸过氧化氢水混合液3～5m1，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱?内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待?泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状?时，再继续加热沸腾l0min，取出待消化液冷却至室温后，加水10～20m1，再?待溶液温度降到室温后，干净地转入50rnl容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。? 3．2蒸馏? ????按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。? ????在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液?使水呈紫红色，连接4，1，2，并检查有无漏气处。? ????量取30m11％硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端? 插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5m1，由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml，?冲洗漏斗5。量取40％氢氧化钠溶液1m1，提起活塞注入瓶1内，立即用水2～?5m1冲洗漏斗5，旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。?????打开簧夹7，关闭活塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时，?经2min降低瓶3，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1min后，用水冲洗管下端。?????蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶l内溶液全部吸入管4中，放松?簧夹7，从漏斗5加入蒸馏水40～50ml，再通蒸气加热和回流，将瓶1洗涤一?次备用。?3．3滴定? ????用0．01N盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。?????为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验。?4结果计算? 粗蛋白质的干基含量按下列公式计算：? 粗蛋白质(干基%)=（V1-V0）*?N?*?14?*?P?*50/V?*?10000/W（100-M）?式中：v——蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml；?????V1广实验用去的盐酸溶液体积，m1； ?v。——空白试验用去的盐酸溶液体积，m1；?????N——盐酸溶液的当量浓度，N；? 14——每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数；? ????P——蛋白质换算系数(小麦5．7，其他谷物及豆类6?25)；?????w——试样重量，mg；?????M_试样水分百分率，％。? ????双试验