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项目二 水中的总大肠和粪 大肠菌群的测定 水中总大肠菌群的测定 总大肠菌群:指那些能在37℃ 48h之内发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。 主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。 水中总大肠菌群的测定GB-T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标.pdf Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 一、测定意义 Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 三、多管发酵法 Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 (2) 水源水：将水样作1：10稀释 Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 (3) 地表水和废水：水样应作1:10，1:100，1:1000或更高的稀释 Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 二、四管发酵法（以轻度污染者为例） Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 三、滤膜法 Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 培养 Ⅱ 水中总大肠菌群的测定 计数滤膜上生长的大肠菌群菌落总数，根据过滤的水样量计算1L水样中总大肠菌群数。 Ⅲ 水中粪大肠菌群的测定 在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。 Ⅲ 水中粪大肠菌群的测定 1.初发酵试验 Ⅲ 水中粪大肠菌群的测定 2.复发酵试验 * * * 生活饮用水的总大肠菌群数每升不得检出 总大肠菌群数：每升水样中所含有的大肠菌群数。 总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法可适用于各种水样（包括底泥），但操作较繁琐，需要时间较长。滤膜法主要适用于杂质较少的水样，操作简单快速。 如果是使用滤膜法，则总大肠菌群可定义为：所有能在含乳糖的远藤培养基上，于37℃ 24h之内生长出带有金属光泽暗色菌落的、需氧的和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 粪便中存在有大量的大肠菌群细菌，在水体中存活的时间和对氯的抵抗力等与肠道致病菌，如沙门菌、志贺菌等相似，因此，将总大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌是合适的。但在某些水质条件下，大肠菌群细菌在水中能自行繁殖，这是不利之处。 作为水体受粪便污染的指标。 二、总大肠菌群的特征 在37℃ 48h之内发酵乳糖产酸产气 是革兰氏阴性无芽孢杆菌 在特殊培养基上能够长出具有典型特征的菌落 为什么将总大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌？ (1) 生活饮用水 ① 初发酵试验 ② 平板分离 ③ 复发酵试验 阳性管接种在伊红美兰培养基上，37℃培养18～24h，挑选典型特征的菌落，涂片、革兰氏染色、镜检 各100mL 原水样 各10mL 37℃ 24h ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ G- G- G+ 37℃ 18-24h 37℃ 24h 水样 25mL 225mL无菌水 各1mL 各1mL 各10mL 10-1 37℃ 24h MPN值=MPN指数× ① 初发酵试验 ② 平板分离 ③ 复发酵试验 革兰氏染色 + _ + + 10mL 水样 25mL 225mL无菌水 1mL 1mL 1mL 10-1 1mL 10-2 37℃ 24h 37℃ 18-24h + + + G- G- G+ 37℃ 24h 滤膜是一种微孔薄膜（孔径0.45μm） 过滤水样 ①滤膜及滤器的灭菌 ②过滤装置安装 ③水样量的选择 ④过滤水样 结果观察和报告 挑选典型特征的菌落进行革兰氏染色、镜检； 染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌再接种于乳糖蛋白胨培养液中，经37℃培养24h，产酸产气者则判为总大肠菌群阳性 37℃ 24h 总大肠菌群数(个/L)= 滤膜上菌落数以20~60个/片较为适宜 一、测定意义 更准确地反映出水质受粪便污染的情况 地表水环境质量标准： 40000 20000 10000 2000 200 粪大肠菌群（个/L）≤ Ⅴ类 Ⅳ类 Ⅲ类 Ⅱ类 Ⅰ类 序号 污染物排放标准： ≤1000 ≤500 ≤100 传染病、结核病医院污水 ≤5000 ≤1000 ≤500 医院、兽院及医疗机构含病原体污水 三级标准 二级标准 一级标准 污水类型 二、测定方法(多管发酵法 ) 水样 25mL 225mL无菌水 各1mL 各1mL 各10mL 10-1 EC培养液 37℃ 24h 44.5℃ 24－48h 阳性管接到EC培养液中。在44.5℃±0.5℃温度下培养24h±2h，立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性 3.计算和报告结果 查MPN表，按总大肠菌群的计算方法计算每升水中粪大肠菌群细菌的MPN值