siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究.pdfVIP

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2017-12-28 发布于北京
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siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究.pdf

第40卷第6期浙江大学学报(医学版) V0140No6 2011生 OFZHEJIANG SCIENCES) 2011 JOURNAL UNIVERSITY(MEDICAL 1．06．002 http：／www．jo岫ls．zju．edu．cn／med DOI：10．3785／j．issn．1008-9292．201 siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究邢小康1，何继亮2，陈智1 (1．浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室，浙江杭州310003； 2．浙江大学医学院环境医学系，浙江杭州310058) [摘要]目的：探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法：用HCV JCl质粒体外制备HCVRNA转录体，转染Huh-7．5．1细胞，收集细胞上清，再次孵育Huh -7．5．1细胞以建立HCV感染细胞模型，并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达。将 h h、48 针对HCVNS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200nmol／L，时间为24 nmol／L 和72h)，将4、40和200siRNA转染正常Huh-7．5．1细胞，并设空白对照、脂质体对照、无 000 RNA和PKR 关siRNA对照以及IFNct-2b(1IU／m1)组，用荧光定量PCR检测细胞内HCV nmol和200 mRNA水平。结果：HCV感染的Huh-7．5．1细胞中检测出HCV核心蛋白表达。40 nmol／LsiRNA24 nmol／LsiRNA48 h组及4、40、200 h和72h组，HCVRNA水平分别降至58％、54 000IU／ml IFN的各时间组HCV PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P0．05)。结论：针对HCVNS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制，而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活。 [关键词]肝炎病毒属／遗传学；RNA，小分子干扰／遗传学；丙型肝炎；RNA干扰；小干扰RNA (siRNA)；HCV复制；NS5B；感染细胞 [中图分类号]R512．63 [文献标志码]A [文章编号] Inhibitionof Cvirus small RNAin hepatitis replicationby interfering cellsinfectedHCV by XING Zhi andTreatment 1(1．State Xiao—kan91，HEJi-lian92，CHEN KeyLaboratoryforDiagnosis of First Diseases，The Infectious AffiliatedHospital，CollegeofMedicine，Zhe