浅述荧光素类化合物研究.pdf

Ⅲ 农药合成与分析 251 浅述荧光素类化合物 段又生 鲁东飞 柳 明 刘尚钟” (中国农业大学理学院应化系，北京100094) 摘 要 简单介绍荧光素类化合物的理化性质、取得的研究进展和荧光素类化合物在生化分 析中的应用。 关键词 荧光探针 含活性基荧光素衍生物 应用 由于生物分子自身荧光较弱，检测灵敏度较差，人们研究用强荧光试剂或荧光生成试剂对 待测物质进行标记或衍生，得到具有高荧光强度的共价或非共价结合的物质，使检出限大大降 低，即荧光探针技术。荧光探针技术较传统的同位素检测快速、重复性好、用量少、无辐射，在 新农药的高通量筛选及离体筛选中，农药残留的抗体免疫分析、DNA自动测序、疾病诊断和抗 癌药物分析等方面已得到广泛应用。目前常使用的荧光探针主要有荧光素类、罗丹明类、香豆 素类等化合物，它们被称为是“在化学反应中与无荧光的化合物之间形成化学键的物质”。其 中含活性功能团的荧光素衍生物因能与其他分子发生某些特异反应而显示出巨大的吸引力， 一直是化学及生物领域中研究的热点。为此，本文对荧光素的自身特点进行了介绍，并对国内 外含活性功能团的荧光素衍生物的设计合成及其应用进行了简要叙述。 1荧光素的介绍 1871年VonBayer首次合成了荧光素I(Fluoresce— in)又称荧光黄，化学名称为3’，6，-Dihydroxyspiro一[iso— H benzofuran一1(3H)，9 7一E9H3一xanthen]一3一one，最大吸收和 发射波长分别在492nm和571nm。因其苯环上有较大 的羧基，使苯环垂直于生色团，从而使荧光量子产率(0． 92，pH≥8)大大提高。荧光素及其衍生物作为一种重要 的荧光探针材料(图1)，连接到核酸、寡核苷酸、药物、蛋 白质等其他分子合成的探针，广泛应用于病毒学、细胞学 及免疫组织化学的检测及表达。但荧光素也存在一些缺 点：如荧光素共轭体不稳定，荧光测试仪的强激光，使之发 Fig．1chemicalstructuresof 生不可逆转的光漂白，导致荧光信号的迅速下降；荧光素 fluorescent compounds 在水溶液中以离子形式存在，其吸收及荧光性质容易受 pH值影响；与标记物共轭连接后，容易发生猝灭。 *通讯作者。联系电话：010E-mail：shangzho@cau．edu．cnll 252 农药与环境安全国际会议论文集 2含活性基荧光素的结构及其应用 由于荧光素自身不含特异性的功能团，已经不能满足不断发展的生物测试的要求，为此， 国内外许多化学及生物学家通过引入不同功能团对荧光素的结构进行修饰，开发研制出许多 含特殊功能团的荧光素衍生物。这些含特殊功能团的荧光素衍生物能与其他分子发生某些特 异反应而更适于对不同的生物体进行标记，因而如今开发特异选择性好的具有活性基的荧光 素衍生物已成为生物分析领域中的研究热点。具有活性功能团的荧光素类衍生物，如异硫氰 酸荧光素(fluorescein 于杂交探针、Edman降解蛋白质测序及抗体的标记。FAM、TET等荧光素衍生物在标记技术 中主要应用于DNA自动测序和核酸探针等。由于笔者正在研究含羧基和氨基的荧光素，所 以主要介绍一下这两类化合物。 2．1羧基荧光素衍生物 羧基荧光素是一种重要的能与生物活性物质键合的荧光标记试剂，其合成简便、成本低 廉。活泼羧基的引入，使荧光素能很好地与蛋白质中的氨基进行反应，但它的反应活性很高， 因而对氨基的选择性较差，所以进一步修饰5位或6位的羧基是当前发展的一个重要方向。 也合成了此化合物。该物质对所处环境的pH值十分敏感，能与细胞中的脂肪氨基键合，从而 降低荧光的消失率。利用该物质Breeuwer等