微囊藻毒素的物理提取方法研讨.pdfVIP

第二届全国环境化学学术报告会论文集 微囊藻毒素的物理提取方法研究 张杭君张建英陈英旭 浙江大学环境与资源学院杭州中国310028 摘要：(本文以实验室培养的铜绿微囊藻PCC7820为样品，比较了微波和沸水浴两种非溶剂萃取法直接从微 、 ＼ ／ 5％±2．7％和93．1％±1．8*。应用沸水浴提取法提取实验宝培养 浴提取法对MCLR和MCRR的回收率分别为91 3±5．1％和0．19±5．3％(pglgW)。 铜绿微囊藻PCC7820，HPLC测定藻细胞中MCLR和MCRR的含量分别为：0．4 实验还表明，沸水浴提取法的效率与70％的甲醇提取效率相当，因此沸水浴提取法可以作为一种可靠的藻 华样品中微囊藻毒素检测的有效的前处理方法，利于避免传统的甲醇等溶剂萃取对后续检测的干扰． 关键词：HPLC，MC-LR，MCjRR，微渡舞取，沸水?渗取 u ★ 凡 V 乙， 0 前言 近年来随着水体污染和富营养化程度的不断加剧，有毒蓝藻水华爆发的强度和频度日趋 严重…，导致许多水体受到蓝藻毒素的污染，危害人体健康。微囊藻是许多有毒蓝藻水华的 优势种”1，其次级代谢产物微囊藻毒素有强烈的诱导肝癌作用，是蓝藻毒素中危害最为严重 的一类毒素。我国最新的地表水水质标准gGB3838—2002中规定，水中Mc—LR的安全浓度 为lug／L”】。因此，研究灵敏简单的检测微囊藻毒素的方法非常必要。对于蓝藻细胞内毒素 的检测必须采用有效的方法对毒素进行提取。目前，许多种溶剂可以用于从蓝藻细胞中提取 微囊藻毒素，最常用的是70％的甲酵等。但是，较高的甲醇浓度会影响蛋白磷酸酶抑制分析 和免疫分析等非常灵敏的生物检测方法。微波提取和沸水浴提取等物理提取法可以有效的避 免这种影响。本研究的目的在于研究低成本、快速的蓝藻细胞中微囊藻毒素非溶剂提取方法。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 SB-C18分析色谱柱(250mm×4．6mm，5 1100液相色谱仪(美国Agilent公司)、Zorbax um)、C18保护预柱、Oasis 准品由浙江大学徐立红教授赠送。 1．2色谱条件 炒矽 第二届全国环境化学学术报告会论文集 u 进样量20L，DAD检测器的扫描波长为200—300nm。 1 3样品前处理 离微囊藻细胞待用。取1．59(w)微囊藻细胞三份，两份加入lOOml去离子水，分别用微波 炉和沸水浴加热提取20min；另一份加入20mi70％甲醇作为提取剂，玻璃研钵内研磨20min， 然后置于超声波清洗器中，超声提取2h。过OasiSHLB固相萃取柱富集，待测。 2 结果与讨论 2．1微波提取和沸水浴提取对miorocystin—LR和际的影响 James等63报道微囊藻毒素MCLR的物理性质稳定，不易挥发，即使在沸水浴加热处理 下也菲常稳定，不会发生分解和异构化。实验表明，微波和沸水浴法对microcystin—LR和 RR的提取效率有显著差异。由表l回收率比较可以明显看出，沸水浴对于MCLR和MCRR的 提取效率要高于微波提取法。微波提取法的低回收率可能是因为微波导致藻毒素结构发生变 异，而沸水浴加热提取法更为可靠有效。 表1 微波和沸水浴提取对标准品的回收率 2．2微波、沸水浴和甲醇提取的效率比较 70％甲醇萃取是经典的微囊藻毒素前处理提取方法。以实验室培养的铜绿微囊藻 PCC7820为样品，分别比较了微波、沸水浴和70％甲醇提取三种方法的效率，结果见表2。 表2微波、沸水浴和70％q日醇对实际样品的提取结果 实测含量(¨g／gWW)