用人工合成多肽作为半抗原制备Bt Cry1Ac的单克隆抗体.pdfVIP

中国农业科技导报，2012，14(2)：88—94 JournalofAgriculturalScienceandTechnology 用人工合成多肽作为半抗原制备 BtCrylAc的单克隆抗体 胡小元， 张岐蜀， 段 伟， 姜国华， 李 玲 (中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081) 摘 要：为了制备BtCrylAc特异性单克隆抗体 (MAB)，本试验从NCBI获得了BtCry1Ac蛋白的氨基酸序列， 根据抗原性、亲水性和表位性分析选定BtCrylAc特异性肽段进行人工合成，并将其偶联于匙孔血蓝蛋 白 (KLH)免疫动物，应用细胞融合技术制备了抗该肽段的杂交瘤细胞34株。通过ELISA和免疫印迹试验从中 筛选出与BtCrylAc天然蛋白产生特异性反应的单克隆抗体杂交瘤细胞株一株(6G9)。ELISA和免疫印迹试 验结果显示，该克隆株所分泌的MAB能对合成肽和BtCrylAc产生特异性反应，而与同源的BtCrylAa、 BtCrylAb天然蛋白均无交叉反应。通过对转基因棉花的ELISA检测结果表明，本试验所制备的BtCrylAc单 克隆抗体能够有效的区分常规棉和抗虫棉 ，并且能对其中的BtCrylAc蛋白进行特异性的识别。 关键词：BtCrylAc；单克隆抗体；合成肽 doi：10．3969／j．issn．1008-0864．2012．02．14 中图分类号：Q819 文献标识码 ：A 文章编号：1008-0864(2012)02-0088-07 PreparationofM onoclonalAntibodyAgainstBtCrylAc byUsingSyntheticPeptideasHapten HUXiao—yuan，ZHANGQi—shu，DUANWei，JIANGGuo—hua，LILing (BiotechnologyResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100081，China) Abstract：InordertopreparemonoclonalantibodyBtCrylAc，wegottheaminoacidsequenceofBtCry lAcprotein from NCBI， and synthesized specific Bt CrylAc peptide， according to its antigenicity， hydro—philicity and accessibilityonthebasisofitsstructuralfeaturesbycomputerassistedanalysis．Thepeptidewaslinkedwithcarrier keyholelimpethemocyanin(KHL)，andthenusedforimmunizedmouseasantigen．34strainsofhybridoma，which canproducemonoelonalantibodiestothepeptide，havebeenobtainedbycellfusiontechnique．Onehybridomastrain (6G9)，whichwasspecifictOnaturalBtCrylAcwasselectedbyindirectELISAandWesternblot．Theresultshowed thatthemonoclonal antibodyofhybridomastrain(6G9)canreactspecificallywiththesyntheticpeptideandBt CrylAcprotein，butcannotreactwithBtCrylAaandBtCrylAbproteinsbyELISA andWesternblot．Thisresuhof experimentshowedthatthemonoclonalantibodyofhybridomastrain(6G9)candistinguishtransgenicBtCr