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植酸酶及其应用 科目： 酶工程 专业： 生物工程 班级： 1203 班 姓名： 莫晓文 学号： 121060102 老师： 刘志伟老师 2015年12月 植酸酶及其应用 摘要：：植酸是畜禽植物性饲料中磷存在的主要形式，绝大多数单胃动物的消化道内缺乏分解植酸的酶，对植物性饲料中植酸的利用率很低。植酸酶可提高动物对磷酸盐的利用率，减少动物排泄物中磷的含量，提高营养成分的吸收利用。对植酸酶的来源、性质、分离纯化及其应用方面取得的研究进展进行了综述，并讨论其进一步的研究发展方向。 关键词 ：植酸酶，分离纯化，应用，研究进程 前言 植酸的化学名称为肌醇六磷酸酯，是一种淡黄色粘稠状液体, 易溶于水,95 % 的乙醇、丙酮、丙二醇、甘油等, 但几乎不溶于无水乙醚、苯、乙烷、氯仿等。是植物种子中肌醇和磷酸的最主要存在形式,。在谷物等食用作物种子中含量高达1％～3％，占植物含磷总量的40％～70％。磷是在动物体内功能最多的无机营养素之一。高水平的植酸降低鱼类的生长率、成活率以及甲状腺功能,使无机盐的利用率下降。而在动物饲喂过程中，饲料中必须供给足够的磷，才能维持禽畜的正常生命及生产活动，因此在饲养过程中必须要考虑饲料中磷添加量的问题。现今养殖业所用的谷物性饲料所占比例很大，谷物中磷的存在形式主要为植酸和植酸盐，绝大多数单胃动物，如猪、鸡的消化道内缺乏分解植酸的酶，对谷物性饲料中植酸的利用率很低[]，且不能被动物吸收的磷排放到环境中会对环境造成污染[]，B O D 和C O D 值升高。同时，植酸易与二价或三价阳离子结合，形成不溶性盐，阻碍动物小肠对矿物质元素[]的吸收，植酸盐的存在还会导致机体内许多种酶活性的降低, 如脂肪酶。Nkcukle 发现各种肌醇磷酸醋都能在体外抑制脂肪酶的活性,，并且植酸会与蛋白质形成络合物，影响蛋白质的吸收。在禽畜的基础日粮中添加植酸酶，可以分解饲料中的植酸，提高动物对植酸的利用率[]，减少磷的排放，提高动物对矿物质元素和蛋白质的利用率[]。因此，对于植酸酶的研究具有重要的经济、生态和社会效益。 １　植酸酶的来源 植酸酶是一种胞外酶， 广泛的存在动物、植物和微生物中。1907年在玉米糠中发现的一种单体蛋白质，之后相继在多种动物、植物及微生物中检测到植酸酶的存在。植物、动物来源的植酸酶最适ph范围较窄，在单胃禽畜的胃肠环境中很难起作用，目前市场上所销售的植酸酶多数来源于微生物。微生物来源的植酸酶有产量高、活性高、成本低及适用于工厂化生产等优点，且植酸酶最适ｐＨ 范围较宽，一般在2.5~6.0，一些微生物菌株所产的植酸酶具有两个最适ph峰值，shiel等筛选的无花果黑曲霉所生产的植酸酶phyA 最适ph 为2.5和5.5，适合单胃禽畜的胃肠道环境。微生物源植酸酶大部分最适温度为40~60℃，可以适应单胃动物胃肠环境，因此微生物产植酸酶成为各大实验室进行植酸酶研究的主要菌株。 2 植酸酶的性质 和其他酶类一样，植酸酶活力[]受温度、激活剂、环境pH、抑制剂、底物及产物浓度等各种因素的影响。不同来源的植酸酶由于氨基酸组成、分子大小、空间结构特点不同，其糖基化程度、Km值、最适pH、等电点、底物专一性、热稳定性等具有不同的性质。植酸酶的分子量一般在60～100KD， 但是微生物植酸酶的分子量比较大， 例如土曲霉的分子量为214KD。植物植酸酶的最适pH 值在5.5 左右。pH小于3.5 或大于7.5 就完全失去活性， 最适温度为45～60℃（祁艳霞[]，2004）。微生物植酸酶的最适pH 一般在2.5～6.0 之间， 最适温度在56℃左右， 超过65℃即失去大部分活性，80℃以上活性损失更大（张勇[]，2002）。动物植酸酶最佳pH 值为5.5，最适温度为37°C（郭圣生[]，2003）。植酸酶的活性还与钙和磷的比值及含水量有关。在研究肉鸡日粮中不同钙磷比对植酸酶添加效果的影响时发现，钙和磷的沉积量随植酸酶的增加而呈线性增加，但钙磷比大于1.4∶1 后线性值出现负效应。Lynch 报道，植酸酶活性要求至少20%～25%， 含水分30时活性最高。 ３　植酸酶的分离纯化[] 对于胞外酶，发酵液经离心过滤，上清液进行硫酸铵分级沉淀或超滤等法进行浓缩; 胞内酶需要破碎细胞后分离，使用醇、丙酮沉淀，硫酸铵沉淀浓缩法。很多研究者通过硫酸铵沉淀法分离植酸酶，收率分别达到16． 8%、50%、78%。盐析、有机溶剂沉淀、超滤等方法都已经成功用于植物、细菌和真菌植酸酶的前期分离纯化中。其中层析纯化，层析技术具有分离步骤少、专一性强、活力损失小的优点，是植酸酶分离纯化[]的主要技术。何海燕[]等对米曲霉发酵液经Qui