牛结核防控技术及研究进展.ppt

牛结核防控技术及研究进展 内容提要 结核病流行现状 牛结核病诊断方法及研究进展 牛结核病预防与治疗 牛尾静脉采血介绍 记录 一、结核病流行现状 结核病概述 结核分枝杆菌引起 慢性消耗性 人畜共患病 OIE：强制报告疫病 结核性肉芽肿（结节） 干酪样坏死或钙化 牛结核病危害 奶牛 牛奶-人结核病传染源 产奶量下降、牛奶品质降低 肉牛-时间短 饲料报酬低 役牛 劳动力减弱 结核病防治的新挑战？人 -牛 二、牛结核病诊断方法及研究进展 结核菌的细胞免疫与体液免疫规律 症状 PPD皮试操作流程 皮试工具 判定标准 结核菌素皮内变态反应的特点 世界动物卫生组织OIE迄今为止唯一推荐的牛结核病的诊断方法 非特异性反应 重症牛敏感性低 操作复杂烦琐 结果判断主观性大 IFN-?释放检测特点 诊断潜伏感染及活动性结核病 高特异性，高敏感性 外周血，24h出结果 比TST更贵，采血后在12小时内检测 Bovi?TB IFN-gamma kit 目前发达国家均以该方法辅助进行结核病根除计划 牛结核病特异抗体检测方法 ELISA方法 胶体金方法 Rv3872 CFP10 ESAT6 MPB70 MPB83 牛结核特异抗体检测 检测针对特异抗原（单个或多个）的抗体 抗体消长规律复杂！ 总体而言抗体水平与病程发展成正比 抗体针对的抗原，抗体类型，抗体水平因个体而异，因时而异 方法敏感性低 多抗原联合使用及与TST联合使用可显著提高检出率 三、牛结核病预防和治疗 预防 检疫 分群隔离 培育健康牛犊 消毒 5%来苏儿或3%氢氧化钠或0.1%-0.5%过氧乙酸消毒畜舍、饲养用具和运动场 牛奶消毒后出场 治疗 早期 氨基水杨酸钠、异烟肼 难以根除 价值不大 四、牛尾静脉采血介绍 尾静脉采血优点 方便快速 一般不需要保定 减小应激 尾静脉采血方法 牛尾静脉位于尾椎腹侧正中的脉管沟内 左手抓住尾巴垂直上举,右手用镊子取5%碘酒棉球在尾根1 /2～1 /3处(离尾根处7-15cm)进行消毒 手持9号采血器,顺血管斜角刺入,见有血液回流,即可外拉针芯使血液流入采血器 采血完毕,局部消毒适当按压 采血工具 血液处理 抗凝血 真空采血管或其它容器内抗凝剂。采集的血液立即与抗凝剂充分混合，防止凝固 肝素：1%肝素0.1毫升可抗凝5-10毫升血 EDTA：每毫升血加入20mg 枸缘酸钠：每毫升血加入3-5mg 血清 标记，室温静置 凝固后吸取自然析出的血清或经离心分离 分装，再贴上标签冷藏保存备检 五、记录 * * * * 人型菌 牛型菌 禽型菌 人 犬 猫 牛 马 羊 猪 鸡 病原-致病性结核分枝杆菌属 人型菌 牛型菌 基因水平上99.95%同源 感染谱相互交叉 10%结核病人感染牛型菌 人型菌可感染牛 (Chen, 2009) 人型与牛型结核菌 结核菌在人与牛之间的传播 除非扑灭牛结核病，否则人类结核病的控制是不会成功的。 ——世界卫生组织第七次专家委员会报告 病程发展 免疫反应 细胞免疫 体液免疫 90%结核菌感染者不发病 细胞免疫和体液免疫分离 早期发生细胞免疫 病程后期体液免疫增加 潜伏期 活动期 16-45d 长者达数月，甚至数年、终生 无明显症状 不发病 肺结核 肺外结核 症状 咳嗽 虚弱 消瘦 呼吸困难 咳嗽加重 鼻孔干酪样鼻汁 胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音 体表淋巴结肿大 结核病诊断 胶体金 γ-干扰素 ELISA PPD皮试 免疫学诊断 分子生物学 体液免疫 细菌学诊断 细胞免疫 剃毛 颈侧中部上三分之一 测量皮皱厚,记录,标记 皮内注射结核菌素 PPD稀释成2万单位/ml,注射2000单位/0.1ml 测量皮皱厚,记录,标记 72小时 75%酒精消毒术部; 左手捏起皮肤，右手持针管; 将针头与皮肤成30-45°角刺入表皮与真皮之间，缓慢注入药液; 以局部形成丘疹状隆起为准。 阳性:皮厚差大于4mm 阴性:皮厚差小于2mm 可疑牛42天后重作皮试 牛与禽结核菌素联用时,牛结核菌素皮厚差大于禽结核菌素皮厚差4mm为阳性,1-4mm为可疑,小于或等于禽结核菌素皮厚差为阴性 阳性:皮厚差大于4mm 阴性:皮厚差小于2mm 可疑:皮厚差2-4mm 疑似牛立即在另一侧用同一批PPD第二次皮试,72h后观察 牛结核菌素单用,或牛与禽结核菌素联用,不少于2000 IU,72h后观察 皮内注射0.1ml(2000IU)牛结核菌素,72h后观察皮厚,96与120h再观察一次 OIE 中国GB/T18645-2002 IFN-?检测方法 检测OD值并确定IFN-g 水平 抽取全血 ESAT-6 CFP-10 有丝分裂原对照 将全血转移至培养孔中, 加入抗原 培养过夜 吸取上层血浆 进行夹心E