人DNA聚合酶δ2真核载体的构建及在HEK293细胞中的表达.pdfVIP

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2017-12-28 发布于北京
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人DNA聚合酶δ2真核载体的构建及在HEK293细胞中的表达.pdf

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人DNA聚合酶δ2真核载体的构建及在HEK293细胞中的表达.pdf

重庆医学2013年5月第42卷第13期 1499 ·技术与方法· 白书媛1‘2，王培昌1△ 摘要：目的构建人DNA聚合酶a2(DNA P0132 用逆转录PCR(RT—PCR)方法从人胚肺成纤维细胞(W138细胞)扩增目的基因DNAcDNA片段，与pMDl8T载体连接， 3．1(+)连接，构建正义构建质粒pMD-18T—P0132；将gl的片段DNAP0132从质粒pMD-18T—P0132切下，与真核表达载体pcDNA 及反义真核表达载体pcDNA3．1-P0182。应用脂质体转染试剂，分别将正义、反义真表达载体pcDNA 3．1(+)转染至HEK293细胞，同时设置阴性对照；用RT—PCR和Westernblot方法检测目的基因DNAP0132mRNA及蛋白表达水平。结果正义和反义DNA P0132cDNA 序列完全一致。RT—PCR方法显示正义及反义真核表达载体转染组细胞的目的基因DNAP0132mRNA表达均明显高于空载体转染组及阴性对照组；Westernblot显示正义真核表达栽体转染组细胞DNAP0132蛋白表达明显增强，反义真核表达载体转染组细胞DNA 人DNA P0132蛋白表达阴性。结论 P0132正义及反义真核表达载体pcDNA3．1-P0132构建成功。关键词：DNA聚合酶Ⅲ；真核载体；细胞 8348(2013)13—1499一03 doi：10．3969／i．issn．1671—8348．2013．13．020文献标识码：A 文章编号：1671 Constructionof vectorsofhumanDNA andtheir inHEK293cells+ expression polymerase82 eukaryotic expression Bai Shuyuanl一．WangPeichan91△ Medi(al 100053，China； (1．DepartmentofLaboratory，Xuanzc，“Hospital，CapitalUniversity，Beijing 2．XlganT．ulgDistri(t Disease(．ontroland Center知r 100053，China) Prevention，Beiiing ToconstructtheDNAPol32 vectorandtoobservetheirtransfectionand Abstract：Objective eukaryoticexpression expres in sionhuman 293(HEK293)cells．MethodsThetotalRNAwasextractedfromhuman cells embryonickindey