具有不同抗螨特性的东方蜜蜂cDNA文库构建和CSP3基因CDs序列分析.pdfVIP

江苏农业科学2013年第41卷第2期 一21一 具有不同抗螨特性的东方蜜蜂eDNA文库构建 和CSP3基因CDs序列分析 陈 杨1，余林生1，申洁琼2，吉挺2，刘振国2，沈杰2 (1．安徽农业大学，安徽合肥230036；2．扬州大学，江苏扬州225000) 摘要：本研究旨在分析不同抗螨特性的东方蜜蜂的CSP3基因的CDs序列的差异，以寻找与抗蟥相关的基因。根 L．)CSP3(Chemosensoryprotein3)基因的mRNA序列设计引物，以cDNA文 据NCBI数据库中西方蜜蜂(却厶mellifera 库为模板克隆并测序获得CSP3基因的CDs序列。结果显示：东方蜜蜂感螨组和对照组在153位点存在碱基变异 (A—G)，该位点的变异为无义突变；东西方蜜蜂在54、164、279、284 (¨T)、G—c(E—D)的差异，西方蜜蜂在112bp位点的gat碱基缺失导致编码氨基酸缺少1个丝氨酸，体现了两者 在物种上的差别。CSP3基因CDs序列的差异与蜜蜂抗螨性能的相关性有待于进一步研究。 关键词：东方蜜蜂；狄斯瓦螨；eDNA文库构建；CSP3基因；序列分析 中图分类号：Q789文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)02—0021—04 蜜蜂具有丰富的社会行为、复杂的信息传递功能和顽强 1．2试验方法 的抵抗力，被作为一种模式生物，2006年西方蜜蜂基因组测1．2．1蜜蜂头部总RNA提取活体蜜蜂头部解剖后立即放 序宣告完成，蜜蜂研究进入了后基因组时代，使得有可能在分 子层面研究蜜蜂的外在生物学特性的分子基础，研究它们表 剂，采用酚／氯仿抽提法提取蜜蜂头部总RNA。 1．2．2cDNA文库的构建 达、调控的分子机理¨‘21。狄斯瓦螨(Varroajacobsoni)是分布 1．2．2．1 cDNA 最广、危害最严重的蜜蜂寄生性病害的病原物之一，给养蜂生 cDNA文库构建和质量检测按照SMARTTM Construction PCR Kit、MaxPlax“ 产造成了严重的损失。因此，目前防治蜂螨的方法也多种多 Library Kit、Advantage@2 Lambda 样，主要是以饲养管理为主，再结合物理、化学和生物等防治 PackagingExtracts试剂盒的方法进行不同抗螨特性 方法口】，其中应用最广泛的是使用化学杀螨剂。但是频繁使 东方蜜蜂头部eDNA文库构建，并通过对总RNA质量、文库 用杀螨剂会使蜂螨产生抗药性，药物如果使用不当也可能残 滴度和扩增文库EST及酶切验证来检验eDNA文库的质量。 留在蜂产品中，从而危害人类的健康H1。因此，抗螨蜂种的 以文库为素材，寻找抗螨基因在不同抗性蜂群中的多态性。 cDNA Con— Library 培育是最为理想的解决方法，已成为国内外众多科研机构的 cDNA文库具体建库步骤参见SMARTFM struction 研究目标。本试验根据前人研究报道，选择CSP基因作为目 Kit相关说明书。以cDNA文库为模板，采用PCR的 的基因口]，构建了蜂螨易感和蜂螨不感2组东方蜜蜂头部 方法对文库进行质量检验。 cDN