内皮衍生超级化因子对脑缺血损伤大鼠脑血管的影响.PDFVIP

安徽 医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Sep；50(9) ·1233 · 内皮衍生超级化因子对脑缺血损伤大鼠脑血管的影响 童晓琴 ，周方杰 ，蔡圣年 ，陈 硕 ，陈志武 ，郭 岩 摘要 目的 探讨 内皮衍生超极化 因子 (EDHF)对局灶性 HF可能是Hs，是半胱氨酸(L—Cysteine)在胱硫醚- 脑缺血再灌注(I／R)损伤大鼠大脑中动脉 (MCA)的血管舒 ^y．裂解酶(CSE)催化作用下产生的，并且CSE在脑 张作用以及对血管平滑肌细胞 (VSMC)超级化反应 的影响。 血管平滑肌细胞和内皮细胞中皆有表达。在大鼠大 方法 线栓法制备大 鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤 脑 中动脉和脑基底动脉上，内源性H：S对血管平滑 模型，按照Longa法对实验动物进行神经功能缺陷评分；采 肌细胞具有超极化作用和血管舒张作用，并且具有 用全 自动酶标仪检测大鼠脑组织硫化氢 (H：S)含量的变化； 明显的内皮依赖性 ，提示脑血管 内皮可通过释放 取局灶性 I／R损伤大鼠MCA，显微镜下测量 MCA的血管直 HS(EDHF)舒张脑血管。在脑缺血再灌注过程中， 径；用微 电极记录MCA 的VSMC的膜 电位；RT—PCR法测定 EDHF是否能起到缓解脑损伤的保护作用，以及与 I／R大鼠MCA 内皮细胞胱硫醚一．裂解酶 (CSE)mRNA表 达。结果 I／R大鼠脑组织中的Hs含量较正常大鼠明显 正常生理条件下的EDHF反应是否有差异，到 目前 增加 ；在离体 I／R大 鼠MCA，用3×10。mol／L的L—NAME 为止还未证实。该实验从EDHF介导的局灶性脑缺 (NO合酶抑制剂)和 1×10 mol／L的Indo(PGI2合成酶抑 血再灌 注 (ischemicaL／reperfusion，I／R)损 伤大 鼠 制剂)预灌30min后 ，乙酰胆碱 (ACh)(10～～10-4．5mol／ MCA超级化和血管舒张反应人手，研究内源性 ED- L)可显著舒张血管，即 EDHF介导的舒张反应明显增强；I／ HF对 I／R损伤大鼠的影响。 R大鼠MCA平滑肌细胞膜电位检测实验中，L—NAME和 In． 1 材料与方法 do存在的条件下，ACh(10。L一10-4．5mol／L)随着浓度增 大 ，产生浓度依赖性的超极化作用 ，并且与正常大鼠MCA相 1．1 材料 比，超极化作用有明显 的增强；I／R大鼠MCA 内皮细胞 中 1．1．1 试剂 左旋硝基精氨酸 甲酯 (Nn·itro—L—argi· CSEmRNA表达上调。结论 EDHF明显增强 I／R大鼠MCA nine—methyl-ester，L—NAME)、吲哚美辛 (indometha— 的血管舒张反应和平滑肌细胞超极化反应 ，表明内源性 ED— cin，Indo)、ACh等均购 自美 国Sigma公司；RT-PCR HF(HS)对局灶性I／R损伤有保护作用。 试剂盒产 自大连宝生物工程有限公司；TRIzolRNA 关键词 内皮衍生超级化因子；硫化氢；局灶性脑缺血；大脑 提取试剂购 自美国 Invitrogen公司；PCR—Marker购 中动脉；血管舒张；超级化反应 自加拿大Fermentas公司；CSE引物和 B—actin引物 中图分类号 R965；R962．1；R743．31 均 由上海生工生物工程有限公司负责合成 。 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2015)09—1233