大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体的构建.pdfVIP

ofAnhui 责任编辑孙红忠责任校对傅真治 安徽农业科学。Journal A出．Sei．2009，37(19)：8895—8897 大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspgl基因毕赤酵母表达载体的构建 别、文秀 (长江大学生命科学学院，湖北荆州434025) 丰乳糖醛酸酶pspgl基因，用限制性内切酶＆oRI和Not1分别酶切此基因和毕赤酵母表达栽体pPIC9K，然后用L连接酶将目的基因克 250 隆到pPIC9K载体中构建此栽体。[结果]扩增的大豆疫霉菌pspgl基因成熟肽片段大小为1bp。用基因特异性引物扩增阳性重组 200 700 子，可得到大小为l 200和1 bp恰 bp的片段。而用载体特异性引物扩增阳性重组子，可得到大小为l bp两奈带，多出来的400 好符合栽体部分的大小。将此特异性片段PcR扩增回收，序列测定发现大豆疫霉pspgl基因已经成功地插入到表达栽体中。[结论] 该研究为进一步研究大豆疫霉菌pspgl基因在毕赤酵母中高效表达奠定了基础。 关键词 大豆疫霉菌；多聚半乳糖醛酸酶；毕赤酵母表达我体；构建 文献标识码A 中图分类号$435．651 文章编号0517—661l(2009)19—08895一∞ Constructionof Vectorof Gene from ExpressionPolygalacturonasepspgl Phytophthorasojae SUN ofLife Science。Yangtze 434025) Wen-xiu(College University，Jingzhou，Hubei wastoconstructPichia vectorof from aim Abstract[Objective]r11Ie expressionpolygalacturonasegenepspglPhytophthorasojae．[Method] was from eDNA the and vector 111e PCR．then genepspglamplifiedP．sojae by polygalaeturonasegenepspglexpression polygalaeturonase werecut restriction ofEcoRlandNot thenthe WS$clonedintothePichia pPIC9K by enzymes I．resp．and targetgenefragment expression vector toconstructthe ofmature of from throu曲T4ligase vector．[Result]rnlelength peptidefragment genepspgl pPIC9K polygalacturonase ofl 200wasobtained．WhjJevector w船l250