基于超滤反应器的蛋白质N-糖基化快速分析方法RapidN-药学学报.PDFVIP

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 15, 50 (6): 755 759 ·755 · 于超滤反应器的蛋白质N -糖 化快速分析方法 * * 偲 , 胡 婷, 张金兰 ( 中国医学科学院、北京协和医学院 物研究所, 北京 100050) 摘要: 随着生物科技的发展, 蛋白质 物正越来越多地被应用在疾病诊疗的各个方面。但是蛋白质的匀质性, 特别是蛋白质N-糖基化修饰成为限制蛋白质 物发展的瓶颈, 因此蛋白质N-糖基化修饰的分析方法正逐渐成为 蛋白质 物研发的关键技术。为了提高蛋白质N-糖基化修饰分析效率, 本文建立了基于超滤反应器的N-糖分离 纯化方法。新处理方法大幅提高了含N-乙 基葡萄糖N-糖的提取效率 ( 10%～20%), 避免了唾液酸结构的降解 (20%～100%), 同时将处理时间缩短至30 min 。通过与HPLC-HRMS 分析方法联用, 提高了样品分析效率。本文 建立了高效、可靠, 适合蛋白质药物的N-糖基化修饰分析方法。 关键词: N-糖基化; 超滤反应器; 液质联用; 衍生化 中图分类号: R9 17 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 15) 06-0755-05 Rapid N-glycosylation profiling of glycoprotein based on ultrafiltration-devices * * TIE Cai , HU Ting, ZHANG Jin-lan (Ins titute of Material Medica, Chinese A cademy of Me dical Sciences and Peking Union Medical College, Beij ing 100050, China ) Abstract : With development of bio-technique, more and more proteins were applied as clinical approaches. However, the protein homogeneity, especially the N -glycosylation limited the further research and application of these protein drugs. The analysis method for N -glycans is believed to be critical in protein drugs development . To enhance the N -glycans isolation efficiency and accelerate the pretreatment, a new strategy was built on ultrafiltration-devices. New methods increased the isolation efficiency of N -glycans containing N -acety