TNF-α可介导谷氨酸对脊髓小胶质细胞的激活.docVIP

精品论文 参考文献 TNF-α可介导谷氨酸对脊髓小胶质细胞的激活 史瑞红 （古交矿区总医院 山西古交 030200） 【摘要】目的 通过观察谷氨酸对脊髓小胶质细胞TNF-alpha;释放的改变，探讨谷氨酸能否激活脊髓小胶质细胞以及激活的最佳浓度和时间点。方法 原代离体培养脊髓小胶质细胞，分别用细胞培养液作为阴性对照组、50mu;M的ATP刺激细胞1小时作为阳性对照组以及谷氨酸通过不同浓度（500mu;M,1000mu;M和2000mu;M）分别作用三个不同的时间点（30分钟、1小时和2小时）作为实验组，通过ELISA法测定上清液中TNF-alpha;的表达水平。结果 500mu;M的谷氨酸孵育1小时，小胶质细胞释放TNF-alpha;并开始被激活，对于1000mu;M和 2000mu;M组，TNF-alpha;在三个时间点增加量都非常明显(P＜0.05)，在1000mu;M 2小时组，TNF-alpha;释放量最多(P＜0.001)。结论 谷氨酸能够激活脊髓小??质细胞，且1000mu;M可能是其最佳浓度。 【关键词】谷氨酸 脊髓小胶质细胞 【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）23-0374-01 越来越多的研究表明胶质细胞是中枢神经系统中进行神经调制、神经营养和神经免疫的重要元件[1]。其中小胶质细胞受到如脑外伤、缺血以及感染等刺激时，就会有形态及TNF-alpha;、NO的释放等系列性的变化[2]。谷氨酸作为一种重要的兴奋性神经递质，参与AD及兴奋性神经毒等疾病[3]，但这些研究只限于对神经元。而对小胶质细胞只是基于如脊髓神经的结扎和切断模型以及病理痛模型在体模型及脑皮层的研究，而对于谷氨酸刺激离体培养的脊髓小胶质细胞的情况尚不清楚。Tsuda等人已经证实50mu;M ATP即可激活皮层小胶质细胞。因此，我们将50mu;M ATP作为阳性对照，通过对离体的脊髓小胶质细胞外源性孵育谷氨酸，从而找到谷氨酸刺激脊髓小胶质细胞释放TNF-alpha;的最佳浓度和时间。 1 材料与方法 1.1 原代培养脊髓小胶质细胞 取出生1-2天的Wistar大鼠的乳鼠断头，用手术刀从背部划开将脊髓取出，剥去脑脊膜，将脊髓切成小块置于含有5%的木瓜蛋白酶中，在37℃下恒温消化25min。再加入含有10%马血清的DMEM/高糖溶液终止消化，用吸管吹打，尼龙网过滤上清液到50ml离心管中，以1000rpm的速度离心5 min。弃上清重悬细胞，细胞密度大概为5times;105个/cm2。培养9-14天后，将细胞置于恒温摇床上以180rpm摇2h，然后重悬上清培养1-2天之后，约95%的细胞为小胶质细胞。最后将细胞分组，收集上清液用于ELISA检测。 1.2 实验分组 根据在体谷氨酸的浓度(1mM)，我们以细胞培养液为阴性对照，ATP作为阳性对照（ATP 500mu;M 孵育1h），将谷氨酸根据不同浓度（500mu;M,1000mu;M和2000mu;M）和不同时间点（30min, 1h和2h）分为9个组。 1.3 ELISA检测 严格按照ELISA试剂盒说明书检测TNF-alpha;的含量。 1.4 数据分析 所有数据均为均数plusmn;标准差。以P＜0.05为具有统计学差异。 2 结果 TNF-alpha;的释放介导谷氨酸对脊髓小胶质细胞的活化 如表1所示，与对照组相比，ATP组释放的TNF-alpha;显著增加；而谷氨酸500mu;M组要1小时才开始表达，在2小时显著增加。而对于1000mu;M和2000mu;M组，TNF-alpha;在三个时间点都大大增加，在谷氨酸1000mu;M组孵育2小时达到峰值(P＜0.05)。 组别 时间 30min 1h 2h 对照 3.38plusmn;3.15 4.37plusmn;2.16 3.98plusmn;5.13 ATP 21.93plusmn;7.01 22.53plusmn;4.17 20.85plusmn;3.12 Glu500mu;M 5.64plusmn;3.23 25.75plusmn;11.63 34.54plusmn;0.14 Glu1000mu;M 35.87plusmn;2.75