两种方法建立小鼠原位肝癌模型的比较.docVIP

精品论文 参考文献 两种方法建立小鼠原位肝癌模型的比较 吴艳 林丹丹 包光明 （苏州大学医学部生物医学研究院 江苏苏州 215123） 【摘要】目的 比较建立小鼠原位肝癌模型的两种方法的优劣。方法 分别采用肝脏原位注射细胞法和尾静脉高压水流动力学注射法建立小鼠原位肝癌模型，对两组小鼠肝脏的成瘤情况进行比较。结果 两组小鼠均能在短期内成瘤，且成瘤率高。结论 尾静脉高压水流动力学注射法比原位注射细胞法更容易操作，小鼠存活率高，肝脏成瘤更均匀。 【关键词】 原位肝癌 模型 高压水流动力学注射 【中图分类号】R73-3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）14-0382-02 原发性肝细胞肝癌是我国乃至全球范围内的研究热点，而原位肝癌小鼠模型是进行原发性肝细胞肝癌基础研究和临床研究的重要工具。目前原位肝癌模型主要采用化学诱导法（DEN），但是该方法建立模型成瘤的时间比较长，大概需要6-8个月，导致研究的周期很长。本文尝试了两种比较快速地建立小鼠原位肝癌模型的方法--肝脏原位注射细胞法和尾静脉高压水流动力学注射法，并对这两种方法建立的小鼠模型进行了比较。 1 实验材料及方法 1.1 实验动物与试剂 C57BL/6小鼠7-8周，雄性，20只,购自上海斯莱克实验动物有限公司。Hepa1-6细胞株购自中科院上海细胞库。DMEM高糖培养基，胎牛血清，购自上海英潍捷基公司。水合氯醛、碘伏购自国药集团。注射器，手术器械、缝合线、针领自苏州大学材料供应中心。 1.2 方法 1.2.1 细胞悬液制备 Hepa 1-6在37℃、5 % CO2 的细胞培养箱中培养，取对数生长期细胞,0.25%胰蛋白酶消化后,收集于15mL离心管中，用PBS调整细胞悬液浓度至5times;107/mL用于原位注射细胞法,每只小鼠注射20uL。用PBS调整细胞悬液浓度至5times;105/mL 用于尾静脉高压水流动力学注射法每只小鼠注射2mL。 1.2.2 小鼠分组 20只7-8周龄的C57BL/6雄性小鼠分为2组，第1组10只进行肝脏原位注射细胞建立模型，第2组10只采用尾静脉高压水流动力学注射的方法建立模型。 1.2.3 肝脏原位注射细胞法 小鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.1mL/只）进行麻醉后，仰卧位并固定四肢于实验板上,用剪子小心剃去胸腹部毛,安尔碘消毒后,沿腹白线逐层开腹,暴露小鼠腹腔,轻压小鼠胸腔,肝脏便跳出腹腔,选取最接近体表的肝叶种植肿瘤。注射针头斜行进针,刺入肝脏约1cm左右,轻推注射器针芯,缓慢注入细胞悬液20ul,约106个Hepa1-6细胞。缓慢退针并无菌棉签轻压片刻后轻送肝脏还纳腹腔,逐层关腹[1]。 1.2.4 尾静脉高压水流动力学注射(HGT) 将小鼠固定于注射架上，用75%酒精擦拭小鼠尾巴找到尾静脉，在8秒之内注射完2mL细胞悬液，小鼠可能会出现短暂的休克，随后苏醒[2]。 2 结果 2.1 原位注射细胞法肝内成瘤情况 手术后第2天和第3天各有1只小鼠可能因为术中感染死亡，2周后处死剩余的8只小鼠，取出肝脏，发现有8只小鼠成功成瘤，肿瘤呈单结节，体积比较大（见Fig1），平均体积 0.98cm2。 2.2 高压水流动力学注射法肝内成瘤情况 注射后所有小鼠存活，注射后3周处死10只小鼠，取出肝脏，发现有所有小鼠成功成瘤，肿瘤呈多结节，体积小，数量多（见Fig2），平均节结数为18个。 2.3 两种方法比较 3 讨论 尾静脉高压水流动力学注射法和手术方法在肝脏原位注射肝癌肿瘤细胞都可以在短时间内建立小鼠原位肝癌模型，且小鼠的成瘤率都比较高。两种方法比较,尾静脉高压水流动力学注射法操作上更简便,小鼠存活率高,成瘤率高,但成瘤时间要稍长于原位注射肝癌肿瘤细胞法。而原位注射肝癌肿瘤细胞法可以在短时间内迅速成瘤，且所成肿瘤很大，但操作复杂。 尾静脉高压水流动力学注射建立小鼠原位肝癌模型可以在注射后3周内成瘤，成瘤率百分之百，建模后小鼠存活率百分之百，所形成的肝脏肿瘤呈散在的多结节，体积比较小，数量比较多，可以通过计数肝脏结节数进行计量评价，该方法操作比较简单，花费时间少，只需进行尾静脉高压注射即可完成。需要注意的是，进行注射时细胞悬液的温度不能太低，如果细胞事先置于冰箱或冰上，需在室温下放置3-5分钟再进行注射，否则会造成小鼠死亡。另外，注