MiR-155对LPS信号通路的调节及机制研究.docVIP

MiR-155对LPS信号通路的调节及机制研究 一、立项的背景和意义 脓毒症(Sepsis)是严重创伤、烧伤、休克、外科大手术后等的常见并发症，进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能衰竭 (multiple organ failure, MOF)，是临床危重患者死亡的主要原因之一[1,2]。临床流行病学资料显示，其发病率高，尤其是创伤及外科病人的发病率更高，死亡率居高不下，在美国每年大约有20万人死于脓毒症，在我国高达30% [3,4]。近年来，随着分子生物学的飞速发展及广泛应用，尤其是microRNA的发现及深入研究，为我们提供了揭示脓毒症发生机制的一个新的契机。 小RNA (microRNA, miRNA)最早发现于线虫,它是一类进化上十分保守、长度约18～22nt的小分子非编码单链RNA，它由基因组DNA编码，在RNA聚合酶Ⅱ的作用下被转录。这些小分子通过RNA诱导沉默复合体 (RNA-induced silencing complex, RISC) 与靶mRNA的3非翻译区 (3-UTR) 不完全互补配对，抑制靶mRNA的进一步翻译或影响mRNA的稳定性，减少蛋白的表达，产生相应的功能表型缺失[5,6]。miRNA可以在基因表达调节网络的多个层面上发挥作用，它是整个基因表达通路的调控者。研究发现，一个单独的miRNA可以结合多个靶基因，而这些靶基因包括转录因子、分泌蛋白、受体、转运蛋白等[7]。因此，明确miRNA的靶基因及评价它们在疾病发生发展中所扮演的角色就显得极为重要。正是由于miRNA调空基因表达具有的这种独特性，现在很多复杂的多基因疾病都从miRNA水平着手进行研究。 研究发现miR-155在机体受脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后以NF-κB依赖的方式表达升高[8]，因此，miR-155在LPS信号通路中可能通过负反馈作用调节机体对LPS的反应及反应程度。如果能弄清楚miR-155是如何通过负反馈调节机制调控LPS信号通路，找到它作用的靶基因，那么当机体出现失控性炎症反应，如脓毒症及脓毒性休克时，我们可以在一定程度上减轻LPS的过度激活，继而阻断LPS对细胞的损伤，减轻LPS引起的脓毒症、脓毒性休克时对组织器官的损伤。这将为脓毒症、脓毒性休克等LPS相关疾病的防治提供新方法和新途径。因此，深入研究miR-155对LPS信号通路的调节及调节机制具有重要的临床意义，它有望成为未来LPS相关疾病防治的新靶点。 为此，本项目拟通过miR-155过表达的方法研究miR-155对LPS信号通路的调节及机制。首先用基因工程技术构建人miR-155表达载体，然后用表达载体转染THP-1细胞，转染细胞经LPS刺激后观察其信号通路中各种信号分子的表达、结合变化。旨在探索miR-155对LPS信号通路的调节及机制，为进一步了解脓毒症及其它LPS相关疾病的发生机制及防治提供新的思路和理论依据。 二、目前研究现状和发展趋势(重点项目需附查新报告) 脓毒症是严重创伤、烧伤、休克、外科大手术后等的常见并发症，进一步发展可导致脓毒性休克、多器官功能衰竭 ( MOF)，是临床危重患者死亡的主要原因之一。临床流行病学资料显示，其发病率高，尤其是创伤及外科病人的发病率更高，死亡率居高不下，在美国每年大约有20万人死于脓毒症，在我国高达30%。近年来，随着分子生物学的飞速发展及广泛应用，尤其是miRNA的发现及深入研究，为我们提供了揭示脓毒症发生机制的一个新的契机。 1、LPS的主要信号转导通路是由IL-1R、TLR4介导，以NF-kB活化转位导致炎症及免疫反应基因转录 研究表明：脓毒症是一种全身炎症反应综合征 (system inflammatory response syndrome, SIRS)。现已证明：内毒素、外毒素、细菌、病毒及寄生虫感染等都可触发失控性炎症反应而引起脓毒症及脓毒性休克[9]，但大多数的脓毒症病人是由革兰氏阴性菌感染所致。革兰氏阴性菌细胞膜上的脂多糖(LPS)是主要的致病成分，它可刺激几乎所有的真核细胞发生形态、代谢和基因表达变化，导致宿主细胞因子失控性表达，介导严重感染、多脏器损伤、脓毒性休克等多种疾病的发生发展。目前，对LPS信号转导通路的研究取得了实质性进展。机体是通过天然免疫细胞表面的模式识别受体 (pattern recognition receptors, PRRs) 来识别LPS。机体受LPS刺激时，类Toll受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)发生同源聚合而活化，在分泌蛋白MD2的辅助下，活化的TLR4胞内尾状结构与髓样分化因子88 (Myeloid differentiation factor 88, MyD88)的TIR域结合，后者通过其死亡