硬脂酸聚烃氧40酯对P糖蛋白和细胞色素P4503A4的影响研究.pdfVIP

柳晨朱赛杰黄客琴裴元英 复旦大学药学院药弃J学教研宣 (上海200032) 关键词硬脂酸聚烃氧(40)酯；P一糖蛋白；P4503A4；影响 平表达。t：l服给药时，P—gP可将进入细胞的药物重新泵回到肠腔，成为口服药物吸收的主要障碍fJ】。现已证实临床应用的许多 药物均为P—gP的底物，如免疫抑制剂；钙离子拮抗荆；抗艾滋病药物；抗肿瘤药物等[21。 细胞。CYP3A4底物覆盖面极其广泛，目前应用于临床的50％一70％药物由CYP3A4代谢【3】。 收的屏障。 ， EL、 80，Cremophor 因此，逆转P一8P的外排作用及抑制CYI3M的活性均可提高该类药物的生物利用度，文献报道Tween poloxamer、C．elucire等表面活性剂具有逆转P—gP外排的作用[引，但表面活性剂对CYF3A4活性的影响未见报道。 硬脂酸聚烃氧(加)酯(Ps)为非离子型表面活性剂，易溶于水，l衄值为16．9。广泛用于难溶性药物的增溶【5．6J。 一印的影响，探讨PS通过抑制P一印和CYP3A4以提高药物口服生物利用度的可能性。 1材料和仪器 仪器HITACH20PR一52D高速离心机；SORVALL 1100 ULTRASO超速离心机；Agi]ent VWD，ALS，ALSTherm)。 (ACROS (DPH，ACROSOrganics)；其它试剂均为分析纯。 人肝脏微粒体的供者编号为HM一03—008，并签署知情同意书，选用供体的HBV、HCV、HIV病毒和性病病原体都呈阴性。 2实验方法 2．1 PS对CYP3A4活性的影响研究 2．1．1原理 睾丸酮是一种以CYP3A4为代谢酶的底物[训，在肝微粒体中可发生羟化反应生成6一p羟基皋丸酮。测定6一p羟基皋丸酮 的生成量，可反映PS对人肝微粒体代谢酶活性的抑制效果。 2．1．26B一羟基睾丸翻HPLC分析方法 固定相：Lun8 Pheny!一Hexyl柱(粒径5mn，4．6mmX 基睾丸酮的峰面积A与浓度c之间呈良好的线性关系，标准曲线方程为A=49．39C一0．8STS(r2=0．9997)。 2．1。3PS对人肝脏微粒体代谢的影响 O．01—10 lmmol／L，PS me／mL。预 反应体系组成：0．1mol／L的陆缓冲液o．5mL(pH7．4，内含微粒体蛋白O．Smg／mL)，NADPH 羟基皋丸酮的产量。 同时进行阴性对照(不含Is)和空白对照(不含PS和NAI)PH)。 酶的相对活性按下式计算： 酶的活性=丽差筹嚣釜装警器篙器詈顽×·00％ 2．2 PS对P一西的影响 2．2．1 PS浓度和P一糖蛋白抑制荆对R123摄取的影响 X一100 300pL裂解细胞，离心后取上清液，测定R123的浓度和细胞蛋白含量。 2．2．2转运试验 一24— 400肛L空白缓冲液。于不同时间取样100r,，同时补加100仙空白缓冲液，测定R123的浓度。 药物的转运用表观渗透系数(Papp)表示，计算公式如下： P唧=糕 其中dQ／dt：单位时间药物转运量(脚Vl／S) CO：供给池R123的初始浓度(埘) A：转运膜面积(cm2) 2．2．3PS对细胞膜流动性的影响Ls】 取生长至融合的Caco一2细胞，消化离心后，加入Hank’s缓冲液稀释成浓度为2×10sceU／mL的细胞悬液。加入DPH(1pM)， DPH在水平和垂直方向的荧光强度，读取细