沙棘果泥中黄酮提取工艺优化研究.docxVIP

２０１２年６月第１０卷第２期《国际沙棘研究与开发》１３沙棘果泥中黄酮提取工艺优化研究，山永凯，刘明（青海清华博众生物技术有限公司，青海西宁８１００１６）摘要：本试验主要研究沙棘果榨汁后的沉淀物中黄酮的最佳提取工艺。采用乙醇回流浸提的方法提取沙棘果泥中的黄酮，使用分光光度计对沙棘果泥中的黄酮含量进行测定。利用正交试验考察提取温度、提取时间以及料液比对黄酮提取率的影响，最终确定提取黄酮的最佳工艺。结果表明：最佳提取条件为提取温度７５℃、提取时间２ｈ、料液比１∶４５。关键词：沙棘果泥，黄酮，乙醇回流浸提中图分类号：Ｓ７９３．６０６文献标识码：Ａ文章编号：１６７２－４８３６（２０１２）０２－００１３－０４沙棘（ＨｉｐｐｏｐｈａｅｒｈａｍｎｏｉｄｅｓＬ．）又名醋材料与方法材料及设备１１．１柳、酸棘、黑刺，是胡颓子科沙棘属落叶灌木或小乔木［１］。沙棘果为颗粒状球型果实，橙红或淡黄色，口味酸甜，风味独特，其中ＶＣ含量堪称“水果之王”。另外，沙棘果中含有大量的黄酮、不饱和脂肪酸、类胡萝卜素、氨基酸等功能成分。药理实验表明，沙棘具有降血脂、抗心律失常、抗氧化、保肝和抗肿瘤等功能［２，３］。还具有直接清除超氧阴离子及羟基自由基的作用，其清除作用比维生素Ｅ还强，抗衰老作用明显［４，５］。其中很重要的活性物质是黄酮类化合物，黄酮类化合物存在于沙棘的所有部位，其中果汁为３６５ｍｇ／１００ｇ，沙棘叶为８７６ｍｇ／１００ｇ，沙棘油为１０６５．２ｍｇ／１００ｇ［６］，沙棘果泥中的黄酮含量经检测达到２．０８ｇ／１００ｇ，含量极其丰富。探讨从沙棘果泥中提取黄酮的方法将为沙棘资源的开发利用开辟新的途径。国内外很多学者做过提取黄酮的研究工作，为沙棘果泥黄酮资源的利用提供了依据。本研究主要利用沙棘果加工后剩余的果泥提取黄酮，采用单因素及正交试验确定最佳的提取工艺。沙棘果泥１．１．１青海清华博众生物技术有限公司提供试剂１．１．２芦丁标准品（中国药业生物制品检定所，纯度：９０．３％）、Ｘ－５大孔吸附树脂（南开大学化工厂）、无水乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、无水氯化铝。设备１．１．３７２２紫外及可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ＲＥ－５２型旋转蒸发仪（上海医械专机厂）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；１０１—２ＡＢ电热鼓风干燥箱；电子天平。试验方法１．２沙棘果泥黄酮提取工艺流程１．２．１沙棘果泥→干燥→粉碎→萃取脱脂→乙醇浸提→水沉降→浓缩→纯化→干燥→成品试验步骤１．２．２（１）原料的预处理：将新鲜沙棘果榨汁后，果汁在低温库中自然沉降，取果泥烘干后粉碎收稿日期：２０１２－０２－１７鲁长征沙棘果泥中黄酮提取工艺优化研究第２期１４６０目，待用。（２）用超临界ＣＯ２萃取技术对沙棘果泥脱脂：取干燥粉碎的沙棘果泥，在２５ＭＰａ压力和４５～５０℃的温度下超临界的萃取沙棘果油，使溶有沙棘油的ＣＯ２依次进入三个逐级减压（压力依次为２０ＭＰａ、１０ＭＰａ、７ＭＰａ）的分离器中，由于减压的原因，使沙棘油在ＣＯ２中的溶解度降低，从而使沙棘油分离出来［６］，脱脂后的沙棘果泥用于提取沙棘黄酮。（３）黄酮的提取：称取沙棘果泥于浸提罐中用５０％乙醇提取，在提取温度为７５℃，料液比为１∶４５的条件下，提取２ｈ。测定黄酮含量，提取液回收乙醇后，加水沉降，除去大分子的蛋白和多糖类物质，取上清液进行蒸发浓缩，浓缩液进入分离纯化工序。（４）黄酮的纯化：将大孔树脂湿法装入玻璃柱，再用２５％乙醇洗涤，然后水洗至无乙醇。将沙棘黄酮提取浓缩液上柱，待吸附完全，用７０％乙醇溶液进行洗脱，测定洗脱液中黄酮纯度［７］。（５）产品干燥：洗脱液浓缩干燥粉碎后，即得沙棘黄酮干燥粉末。表１标准曲线制作数据芦丁浓度实验号吸光度（／）ｍｇｍＬ１０．０００．００２０．１９１０．０１３０．３９３０．０２４０．６０４０．０３５０．８４２０．０４６１．０５１０．０５利用最小二乘法计算直线回归方程的公式：Ｙ＝２１．０９１４Ｘ－０．０１４６，Ｒ＝０．９８５９式中：Ｘ为待测液中黄酮类物质的质量浓度（ｍｇ／１００ｇ）；Ｙ为吸光度（Ａ）。沙棘黄酮的计算方法１．３．２精密吸取提取液５ｍｌ至５０ｍＬ量瓶中，加５０％乙醇定容至刻度，摇匀。再从该量瓶中各吸取５ｍＬ置于另外两支５０ｍＬ量瓶（１＃，２＃）中，加入１％ＡｌＣｌ３蒸馏水溶液１ｍＬ，１＃、＃２２＃均用５０％乙醇定容至刻度，摇匀。８ｍｉｎ～１０ｍｉｎ后在５１０ｎｍ下测定各自的吸光度（记为沙棘黄酮的测定方法１．３１）。利用上述所求的回归方程求得浓度０、ＡＡＣ标准曲线制作１．３．１（其中Ａ＝Ａ１－Ａ０）。精确量取标准溶液０．０，２．５，５．０，７．５，１０．０，１２．５ｍＬ。分别置于２５ｍｌ容量瓶中，加３０％乙醇补足至１２．５ｍＬ。加５％亚硝酸钠溶液０．７５ｍＬ摇匀，放置５ｍｉｎ后，精确加入１０％硝酸铝溶液０．