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精品论文 参考文献 对艾滋病检测技术发展趋势的研究 谷金林 (曲靖市麒麟区疾控中心艾防科 云南曲靖 655000) 【摘要】 AIDS是全球严重的公共卫生问题。对该病的准确检测是防治其广泛传播的重要手段。近年来，随着该领域不断创新和研究，AIDS检测技术的简易、快速、灵敏性逐步提高，本文着重从免疫学、分子生物学、基因芯片、P24抗原等方面对目前检测技术发展的趋势作一综述。 【关键词】 艾滋病 检测技术 发展趋势 【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）20-0360-01 一、人免疫缺陷病毒基因组结构和特点 AIDS病原体为免疫缺陷病毒(HIV)，有HIV-1、HIV-2两类。属逆转录病毒，基因组很复杂，含4个开放读码框架(ORF)，分别具有gag、pol、env、sor等基因，翻译形成多种糖蛋白。HIV病毒颗粒呈球形,直径100～120nm，具72个由gp41、gp120组成的棘突，核心含P24、P17、P9、P7核衣壳蛋白[1]。 二、免疫学检测方法 1.免疫吸附试验（ELISA） ELISA是最常用的初筛实验法［2］，其1代试剂以病毒裂解物、部分纯化的病毒抗原包被反应板。假阳性率较高。2代试剂以重组抗原、合成肽包被反应板,特异性较好。3代试剂以双抗原夹心法检测抗体,敏感性进一步提高，可检出IgM抗体,窗口期由10周缩至3～4周。但仍有假阳性发生。4代试剂把HIV抗原和抗P24抗体同时包被反应板,窗口期缩短至2～3周，且能检测抗原抗体，降低血源筛查残余危险度。在早期诊断上优于3代试剂。但4代试剂存在抗原抗体相互干扰的可能，是否影响免疫反应特异性，尚需临床实际检验［3］。 2.免疫印迹试验 (WB) WB是最常用的HIV抗体确认方法。病毒裂解物、重组抗原、合成肽均可做WB的抗原。其最早出现的条带是P24或gp160。通常认为WB灵敏度和特异性较ELISA高。但其自身抗体或其他特异性反应干扰，约有2％的假阳性［4］或不确定结果，尤其在ELISA阳性标本中,不确定高达4%～20%,其原因需复查得以明确。 3.分子生物学检测法 对HIV的核酸进检测是分子生物学方法的主要内容,定性用于HIV感染的辅助诊断,定量用于监测HIV感染者病程进展和治疗效果。 4. HIV核酸定性检测　 利用PCR技术可对急性感染期、抗体检测不确定患者进行辅助诊断或血液筛查。另外，该技术对HIV阳性母亲产下婴儿的检测诊断意义巨大，检测出生48h内婴儿敏感性达38%,检测出生14d内婴儿敏感性达93%[4]。但由于需开盖取样电泳，其本身敏感性又高，“污染”会时有发生，导致出现假阳性。 5. HIV核酸定量检测 5.1逆转录PCR技术（RT-PCR）： 该技术可在2h内完成cDNA形成，多聚酶链式反应、扩增产物并变形等过程，进而完成凝胶电泳或实时荧光检测。 因此，该技术的多种改良方法支持HIV快速临床诊断[5]。 5.2分支DNA信号扩大系统（bDNA）： 主要检测HIV-1型RNA。人工合成的DNA片段侧链上均可标记被激发的标记物，可通过标记物与样品HIVRNA含量比例进行定量。 由于bDNA的探针覆盖整个基因组，还可检测HIV的部分变异株。 bDNA不存在扩增物的交叉污染，但灵敏度不及PCR。 5.3核酸序列依赖的扩增系统 (NASBA)： 该技术将病毒RNA加入AMV逆转录酶、核酸酶H（Rnase H）、T7RNA聚合酶和引物进行扩增。无需热循环装置，适合对冻存血浆进行回顾性分析。其高效扩增的特性，使其可和多孔板酶介导的显像技术及荧光实时检测结合应用。该法扩增产物交叉污染较少，但操作繁琐，不宜大批量处理，扩增退火温度较低,易引起非特异性扩增。 5.4转录介导的扩增系统(TMA)： TMA 技术利用了MLV逆转录酶、T7RNA 聚合酶，MLV逆转录酶同时具有逆转录酶、RNA酶活性，反应温度为41.5℃。 6.基因芯片检测技术 该技术是核酸分子杂交和PCR技术的结合，可直接对病原体进行检测。通过对HIV基因组进行分析, 将其高度保守序列视为鉴定指标，极大提高了诊断的准确性。Hauser等[6]发现，DNA芯片技术对AIDS早期诊断意义重大；HIV PRT44