无公害食品猪肉标准 磺胺类药物在动物可食性组织中高效液相检测法.pdf

无公害食品猪肉标准 附 录 E （规范性附录） 磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法 E.1 适用范围 本方法用于测定动物可食性组织中磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM　 2）、磺胺甲恶 唑（SMZ），磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹恶啉（SQ）单个或混合物的残留量。 E.2 原理 组织经乙腈提取后，其上清液再加入正己烷，向离心后的下层溶液加入正丙醇，减压干燥后的残留 物用乙腈溶解，过Sep-Pak 氧化铝B柱，洗脱液再用正丙醇处理，减压干燥后的残留物经流动相溶解后， 所制样液用高效液相色谱仪进行检测。 E.3 可靠的检测限 本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05μg／g。 E.4 仪器 E.4.1 高效液相色谱仪，配紫外检测器。 E.4.2 匀浆机。 E.4.3 旋转蒸发仪。 E.4.4 磁力搅拌器。 E.4.5 电子天平：感量0.000 01g。 E.4.6 离心机。 E.4.7 振荡器。 E.4.8 抽滤器。 E.4.9 离心管。 E.5 药品和试剂 E.5.1 SMM，SM ，SMZ，SDM，SQ标准品：纯度≥99％。 2 E.5.2 乙腈：色谱纯。 E.5.3 甲醇：分析纯，经重蒸馏。 E.5.4 乙酸：分析纯。 E.5.5 正己烷：分析纯，经重蒸馏。 E.5.6 正丙醇：分析纯，经重蒸馏。 E.5.7 无水硫酸钠：分析纯。 E.6 溶液 磺胺类药物标准液：准确称取适量各个磺胺药，用甲醇溶解，配制成适当浓度的标准储备液。临用 前，取此储备液，用流动相稀释成浓度为0.1μg／mL～20μg／mL的标准工作液。 E.7 分析 E.7.1 Sep-Pak氧化铝B柱的制备 称取高温下加热3h的氧化铝粉，加水搅拌均匀，振荡3h 后填充入玻璃柱中，用95％乙腈5mL前处 理后备用。 E.7.2 提取和纯化 称取组织样品5g（精确到0.1 g），加人乙腈25mL，无水硫酸钠少许（血清除外），匀浆后，以3 000r ／min的速度离心5min。分离后的残渣再用25mL乙腈处理，振荡10min后，以3 000r／min的速度离心 5min。合并两次的上清液，加入正己烷30mL，振荡10min 后，以3 000r／min的速度离心5min，取下层液 体，加入正丙醇10mL，50℃：下减压干燥，残留物用95％乙腈3mL溶解，过Sep-Pak氧化铝B柱。用95 ％乙腈5mL过柱，不收集，再用70％乙腈 10mL洗脱后，洗脱液中加入5mL正丙醇，50℃下减压干燥后， 残留物用2.0mL流动相溶解，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。 E.7.3 检测条件 E.7.3.1 色谱柱：C 　柱，250mm×4.6mmi.d.。 18 E.7.3.2 流动相：乙腈-甲醇-水-乙酸（2+2+9+0.2）。 E.7.3.3 流动相流速：1.0mL／min。 E.7.3.4 检测波长：270nm。 E.7.3.5 进样量：20／μL。 E.7.4 样品测定 分别将等体积标准液和试样溶液注入液相色谱仪，标准工作液及试样中磺胺类药物的响应值均应在 仪器检测的线性范围之内。试样液测定过程中要参插注入标准工作液，以便准确定量。 E.7.5 计算 用色谱数据处理机或按式（E.1）计算试样中磺胺类药物残留量： W=H．Cs / Hs ．c ··················· （E.1） 式中： W ——试样中磺胺类药物残留量，单位为微克每克（μg／g）； H ——试样中磺胺类药物峰高，单位为毫米（mm）； Hs ——标准工作液中磺胺类药物峰高，单位为毫米（mm）； Cs ——标准工作液中磺胺类药物浓度，单位为微克每毫升（μg／mL）； c——最终试样液所代表的试样浓度，单位为克每毫升（g／mL）。