ELISA法检测HBsAg（乙肝表面抗原）出现假阳性的原因分析.docVIP

精品论文 参考文献 ELISA法检测HBsAg（乙肝表面抗原）出现假阳性的原因分析 王小梅 （武汉市阳逻中心医院 430000） 【摘要】目的 分析ELISA法检测HBsAg（乙肝表面抗原）出现假阳性的原因。方法　通过对ELISA法的原理和操作过程中可能出现的各种影响因素进行综合分析。结论　导致ELISA 检测出现假阳性结果的原因有很多，试剂盒的因素、溶血标本的影响、标本离心等等。 【关键词】 ELISA HBsAg 假阳性 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）24-0337-02 我国是乙型肝炎的高发国家，乙型肝炎是目前严重危害我国人民群众身体健康的传染性疾病之一。HBsAg(乙型肝炎表面抗原)，是检查乙型肝炎的感染主要指标之一，HBsAg(乙型肝炎表面抗原)是乙肝病毒的外壳蛋白，其本身是不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。在我国大多数地方常规体检项目之一就有HBsAg(乙型肝炎表面抗原)的检查，HBsAg(乙型肝炎表面抗原)对乙肝的预防和治疗具有重要的临床意义。酶联免疫吸附剂测定，（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法是目前我国检测乙肝HBsAg最普及的方法之一，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、重复性好等诸多特点，适用于血清和血浆标本，具有广泛的实用性和可操作性[1]，广泛应用于各类医院的实验室。 1971年科学家Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。 ELISA的原理 ① 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ② 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 ELISA检测出现假阳性结果的报道时有发生，假阳性的检验报告往往会误导临床医生的诊断治疗，甚至产生医疗纠纷。引起假阳性的原因有很多，大体上分试剂、标本、操作等因素[2]。 具体分析如下： ① 试剂盒的因素:要选择通过检验合格的、灵敏度适中的试剂盒。 ② 溶血标本的影响:溶血后的血清所残留的过氧化物酶，使 HBsAg产生假阳性。 ③标本离心:不够完全的标本离心,使得血液还没有达到彻底凝固的状态或血清析出不够完全，就直接检测,致使反应孔出现凝血现象，又或者是受到其它干扰，例如残留细胞成分的干扰,也会出现HBsAg假阳性。 ④加样时间的影响:两次标本加样间隔时间过长,尤其是夏季的高温会对HBsAg检验结果产生较大干扰。 ⑤洗板影响:不合格的蒸馏水，没有达到标准浓度的洗涤液，堵孔的洗板机等多方面原因都有可能导致HBsAg出现假阳性结果。 ⑥显色:影响显色的最主要因素是温度和时间，当温度在37℃时,两者成正比。 ⑦操作不当与其他:错误的加样量,标本被污染等原因都会使HBsAg出现假阳性。 如何尽量避免假阳性的出现： ELISA法检测HBsAg操作简便,但HBsAg的检验结果很容易受到诸多因素影响，出现假阳性。所以要作好此项检验,应当注意以下几点: ①选择的试剂盒必须是经过卫生部批检合格的，还需要注意试剂的批号、出厂日期，不同厂家和批号的试剂禁止混合使用。 ②必须空腹采血,避免出现溶血,加大标本的离心转速（3000r/min），充分离心，尽可能延长离心时间。避免因为纤维蛋白丝的混入而影响检查结果。 ③封板温育时各孔务必要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生假阳性[3-4]。 ④水浴箱温度保持在37℃,显色时间到再加终止液； ⑤坚持室内质控和阴、阳性对照同时做,HBsAg弱阳性标本一定