NS-398抑制颊鳞癌MMP-9水平的研究.docVIP

精品论文 参考文献 NS-398抑制颊鳞癌MMP-9水平的研究 （1扬州市江都区人民医院 江苏 扬州 225200） （2扬州市苏北人民医院 江苏 扬州 225200） 【摘要】 目的：探讨非甾体抗炎药NS-398对颊鳞癌MMP-9水平的影响。方法：选用人颊癌细胞株BcaCD-885为研究对象，荧光免疫组织化学和Western Blotting法观察A、A1、A2、A3中MMP-9表达的影响。结果：A、A1、A2、A3中BcaCD-885细胞24h后荧光免疫组织化学显示，各个浓度的NS398干预BcaCD-885细胞后MMP-9的表达较对照组有明显降低。Western Blotting法观察各个浓度NS-398干预BcaCD-885细胞后MMP-9的蛋白条带随药物浓度的增加而递减。结论：NS-398可作用于BcaCD-885细胞株能够抑制其MMP-9蛋白水平的表达，并且随着药物浓度的增加而明显减少。 【关键词】 NS398；颊鳞状细胞癌；BcaCD-885细胞株；基质金属蛋白酶-9 【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）02-0109-02 颊癌是危害人类健康的口腔常见肿瘤之一，是常见的口腔鳞状细胞癌，其浸润性较强，严重危害患者的生命健康及生活质量。手术切除仍是治疗颊癌的主要手段，但是术后复发及转移率高是造成治疗失败的主要原因[1]。本研究主要探讨非甾体抗炎药NS-398对颊鳞癌MMP-9水平的影响，并做如下报道： 1.材料与方法 1.1 实验材料 BcaCD-885细胞株（购自中科院上海细胞库），电泳仪。主要试剂：NS-398：美国三塔试剂公司；胎牛血清：杭州四季青生物工程有限公司；RPM1640：培养基赛默飞世尔生物化学制品有限公司；一抗 Anti-MMP-2 bs-0397R：北京博奥森生物有限公司；C-0007制胶试剂盒；北京博奥森生物有限公司；荧光二抗Goat Anti-rabbit IgG/Cy3 ：北京博奥森生物有限公司；普通二抗 Goat Anti-Rabbit IgG：北京博奥森生物有限公司；主要实验仪器：CO2恒温细胞培养箱，超净工作台，倒置显微镜。 1.2 实验方法 （1）细胞培养：人颊鳞癌细胞株BcaCD-885用含有10%的胎牛血清的RPMI1640培养液在37℃细胞培养箱中培养。培养液中含有青霉素、链霉素均为100U/ml，用NaHCO3调整PH值至7.2～7.4。温箱中含5%CO2及95%空气饱和湿度。当贴壁细胞铺满瓶底的80%时进行细胞传代。 （2）NS-398 储存液：将NS-398用DMSO配置成2.5Mmol/L的储存母液，过滤除菌后分装，置-20℃冰箱保存、备用。 （3）标本分组：不加药组加入10%培养液在37℃、5% CO2条件下培养24h，加药组分别加入含10(A1)、20(A2)、40(A3)mol/L的NS398培养液干预24h。 1.3 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件处理数据，常规统计分析；两组均数比较用t检验，多组均数比较用方差分析；以P＜0.05具有统计学意义 。 2.结果 2.1 荧光免疫组织化学检测MMP-9蛋白的表达 荧光免疫组化实验结果显示见（表1），荧光免疫组化照片如图所示：A,A1,A2,A3组BcaCD-885细胞中MMP-9的表达水平与对照组比较呈降低趋势，经图像分析软件及SSPS11.5统计软件分析得出两组细胞MMP-9的表达水平各组之间有显著的统计学意义（P＜0.05） 2.2 Western Blotting检测MMP-9蛋白的表达水平 Western blotting结果显示NS-398各浓度组A,A1,A2,A3组BcaCD-885细胞中MMP-9蛋白表达的相对值见（表2）,经过单因素方差分析，在不同浓度NS-398干预下，MMP-9蛋白表达组间差异有统计学意义（P＜0.05）。 3.讨论 金属基质蛋白酶-9是一类活性依赖于锌离子的蛋白水解酶，不但介导肿瘤细胞对宿主的包括基底膜在内的细胞外基质的降解，还控制肿瘤新生血管生成以及调控肿瘤细胞的生长等。实验研究证明，非甾体抗炎药可降低肿瘤的发生率并抑制肿瘤的形成，降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，其作用机制主要与其抑制COX-2的活性，减少前列腺素（PGs）合成有关[