现代实验技术概述.ppt

引物1 引物2 模板 PCR原理示意图 目的基因增加2n 20～30循环 94℃变性 5’ 3’ 3’ 5’ 变性94℃ 引物 退火45-65 ℃ 延伸72 ℃ PCR过程示意图 模板 PCR反应产物积累规律示意图 平台期 产 物 量 时间（循环数） PCR反应五要素 引物（primer） 酶 （Taq DNA polymerase） dNTP （dATP,dGTP,dCTP,dTTP） 模板 （template） Mg2+ （magnesium） 实时荧光定量PCR 常规PCR：借助电泳对扩增反应的终产物进行半定量及定性分析 实时荧光定量PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，最终精确的对起始模板的定量分析 淬灭基团 R 荧光定量PCR示意图 模板DNA DNA探针 R Q Q 报告基团 Western Blotting §印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 §1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。 §而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印