Cdc20基因突变与小鼠结肠癌的发展（）.docVIP

Cdc20基因突变与小鼠结肠癌的发展 loxp/+ loxp/+ 并将构建好的载体,经囊胚注射构建 cdc20 基因敲除小鼠。将 cdc20 基因突变小鼠 min/+ loxp/+ min/+ 与APC 基因突变小 鼠交配, 运用 PCR 进 行基因鉴定, 得到 cdc20 ;APC 基因型小 鼠作为实验组, 余基因型小鼠作为对照组。 通过表型分析及组织学分析, 比较实验组及对 loxp/+ min/+ loxp/+ min/+ 照组的差异并探求其分子机制。 制作 cdc20 ;APC 基因型、cdc20 基因型、APC 基因型 和 WT 基因型的小鼠胚胎成纤维细胞 (MEFs ) , 绘制生长曲线 比较各种基因型 MEFs 生长情况。各种基因型 MEFs 细胞滴片计数 染色体个数,并 检测有丝分裂姐妹染色单体分 离情况及是否存在非整倍体 (aneuploid ) 。 构 建 PMXs-E1A-RAS 病毒载体, 将其转染入各 种基因型 MEFs 细胞, 进行克隆形成实验, 阐 明 cdc20 基因是否具有加快细胞转化的能力。 通过上述体外细胞实验进一步证实并揭示 cdc20 对结肠癌发展的影响及其分子机制。 loxp/+ min/+ 结果 : 表型分析显 示 cdc20 APC 基因突变 小鼠 肿瘤个 数与 对照 组无明 显差异 ,肿瘤 loxp/+ min/+ 的最大直径实验组和对照组之间无明显差异。 病理切片显示 ,cdc20 APC 基因突变小 鼠肿瘤恶性程度高, 病理类型 为腺癌,而对照组为腺瘤。 各种基因型 MEFs 生长曲线显示 min/+ loxp/+ APC -Cdc20 MEFs 增殖速度要快于其他基因型的 MEFs 。克隆形成实验显示 , 转染 min/+ loxp/+ 了 PMXs-E1A-RAS 质粒的 4 种基因型 MEFs 中, APC -Cdc20 MEFs 发生转化的速度 min/+ loxp/+ 要快于其他组。MEFs 细胞滴片计数染色体显示 APC -Cdc20 小鼠 MEFs 中可见姐妹 min/+ 染色单体的提前分离,且染色体数目异常要多于 APC MEFs ,大多数为 38 对。 min/+ loxp/+ 结论 : (1)Cdc20基因一条 同源臂的敲除可促进小鼠结肠癌的发展。 (2 )APC -Cdc20 min/+ loxp/基因型 小鼠MEFs中存在姐妹染色单体的提早分离及 大量aneuploidy。(3 )APC -Cdc20 + 基因型 小鼠MEFs 可 发生 细 胞 转 化 ,Cdc20 基因 突 变 有 致 癌作 用 。4Cdc20 是 通 过 基 因不 稳 定来影响结肠癌的发展的。 关键词:cdc20;结肠 癌;基因不稳定 I 暨南大学硕士学位论文 Cdc20 基因突变 与小鼠结肠癌的发展 Abstract Objects: Demonstrate the relationship between cdc20 mutation and the promotion of colon cancer, furthermore indicate the molecular mechanismMethods: Apply homologous recombination technology and blastocyst injection, to generate mice carrying cdc20 a null allele caused by the presence of the loxp cassette. Genotyping the mice by PCR,to yield experimental and control mice. Compare the experimental and control mice by phenotypic analysis and histology analysis, to discover the differences and the loxp/+ min/+ molecular mechanism. Derive mouse embryonic fibroblasts MEFs of cdc20 ; APC , loxp/+ min/+ cdc20 , APC and WT genotype from embryos for growth curve analysis and karyotype analysis. Compare the difference of growth with growth curve analysis .D