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dna分子的提取和鉴定
讨论: 答:让细胞内浓度大于周围溶液的浓度,细胞会吸水以至胀破 (1)为什么要加入蒸馏水?加入蒸馏水后细胞会有什么变化? (2)用玻璃棒搅拌有什么意义? 答:用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌,但也不能太快太猛,防止打碎DNA (3)滤去的是什么物质?得到的是什么? 答:过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质;得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA ②溶解细胞核内的DNA 将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol/L) ③析出含DNA的粘稠物 讨论:加入蒸馏水的目的? 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点,使DNA从NaCl溶液中析出 将溶液中的DNA与其他杂质分离,这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕 注意事项: ④滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中,含 DNA的粘稠物被留在纱布上 ⑤将DNA的粘稠物再溶解 取 1个 50 mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃择不停地搅拌,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中 ⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液 取1个100 mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液,DNA溶于滤液中 ⑦提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中,加入冷却的、酒精的体积分数为 95%的溶液 50mL(使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳),并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA DNA的粗提取与鉴定 目的要求 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 3、观察提取出来的DNA 实验思路 1、DNA从哪提取? 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离? 3、怎样鉴定我们提取的DNA? 实验原理 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响 4.大多数蛋白质不能忍受60-80°C的高温,而DNA在80°C以上才会变性 5.洗涤剂可以瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。 6.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 实验用具:铁架台;铁环;镊子;三角架;酒精灯;石棉网;载玻片;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒(100ml,一个);烧杯;(100ml,一个,50ml、500ml各二个);试管(20ml,二个);漏斗;试管夹;纱布。 8、DNA的鉴定 ① DNA与二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 ②紫外灯照射法 A、配制染色剂,用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭(EB) B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴一滴EB溶液染色 C、将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中),可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260 nm处) ③甲基绿 (蓝绿色) 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 (一)实验材料的选取 材料:新鲜的鸡血 注意: 本实验中,要往鸡血中加入抗凝剂(柠檬酸钠溶液) 原则上只要含DNA的生物材料都可以,但是选取DNA含量相对较高的生物组织,成功率更大。 (1)先将新鲜的鸡血离心,获得鸡血细胞 (2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可 (二)破碎细胞,获取含DNA的滤液 1、破碎细胞 讨论:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂? 利用了什么原理? 2、过滤,获取含DNA的滤液 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2、植物细胞 讨论:加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么? 答:洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解 ②实例:提取洋葱DNA时,在切碎的洋葱中加入
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