有机合成制药废水生物毒性检测研讨.pdf

持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 有机合成制药废水生物毒性检测研究 张徐祥，赵大勇，孙石磊，潘文扬，吴兵，贾海鹰，陈大伟，朱程军，程树培+ (1、南京大学污染控制与资源化研究国家重点实验室，环境学院，南京210093； 宰联系人，E—mail：chengsp@nju．edu．en) 摘要：XZEH合成制药废水0．2mL／d(COD=13220mg／L)灌胃雄性小鼠染毒35d，血清谷丙转 氨酶和乳酸脱氢酶水平降低，尿酸水平上升，精原细胞(2C)百分率下降，精子畸形率上升。废水 中有毒有机污染物对小鼠的综合毒效应剂量为52．25mg／Kg／d，是最高允许值22倍；对斜生栅藻生 长的安全浓度为0．279mg／L，是最高允许值的1／866。有关规定或标准不足以保证该废水具有环境 健康生态安全性。 关键词：制药废水；雄性小鼠；斜生栅藻；生物毒性；环境健康；生态安全 1．引言 盐酸丁螺环酮(busprione 有机合成的人类神经功能调节药物，它们具有的生物毒性包括：干扰胎儿正常发育直至死亡…；降 低幼儿肾上腺皮质激素水平导致生命危险[2-3]；引发患者血栓、疼痛、遗忘症等等【4】。生产废水中 等。它们具有增加小鼠肝癌的发病率[5-111，使女工降低或彻底丧失生育能力[12-14]，引发小鼠淋巴 5|。 细胞的基因突变，造成豚鼠肝凝血酶原的形成障碍等等【l 上述制药生产废水中含有3种药物和3种原料等有毒有机化合物，其中部分污染物属于POPs (persistentorganicpollutants)，常规的检测方法与排放标准，难以检测与评估其中的生物分子毒性。 目前国际上已开始应用基因组学、蛋白组学、血清学等生物技术和生物信息技术，检测评估POPs 和EEDs的生物分子毒性。本研究检测制药废水对小鼠的血清学分子毒性、生精细胞DNA分子毒 性、精子细胞畸形毒性和藻类生态毒性，用Wyrobeck(1983)标准，判断染毒小鼠精子的畸形率【161。 同时检测了制药POPs废水对斜生栅藻合成叶绿素a的功能毒性，进行了安全预警的研究。 研究结果发现合成制药POPs废水，对染毒雄性小鼠存在3项血清生化的分子毒性，损害了雄 性小鼠的肝肾功能；降低了雄性小鼠生精细胞的数量，提高了雄性小鼠精子细胞的畸形率；对斜生 栅藻具有抑制作用和致死效应。 2．材料与方法 2．1废水的水质参数检测 测定金属元素采用美国Jarrell-Ash的ICP-J．Al 100直读光谱法。制药废水的水质分析结果见表1。 表1 XZEH合成制药废水的水质分析结果 注：参数单位均为mg／L 2．1受试动物与染毒处理 昆明种(Mus 机分为对照组和染毒样品组，每组各12只。样品组经灌胃0．2mL／d合成制药废水染毒处理35d，对 照组灌胃0．2mL／d生理盐水35d． 322 持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 2．3血清生化的分子毒性检测 从受试小鼠的眼球采取血液样品，室温静置分离血清。用日立7600全自动生化分析仪，测定 小鼠血清中15项肝肾功能的生物化学指标。应用excel软件处理测定数据，进行t检验，判断样品 组和对照组小鼠血清生物化学指标的差异显著性。 2．4流式细胞仪DNA定量分析 取出受试小鼠睾丸，置于冷PBS液中洗两次，小心除去被膜和血管，用眼科剪将组织剪碎， 转移至50mL离心管中，漩涡振荡器振摇1分钟，使生精细胞震离出组织，再通过100目钢筛过滤， 收集细胞悬液，12000r／min，离心10min后加PBS液调整细胞浓度为106—107个／mL，用70％冷酒 配套软件自动分析后获取，以x土s表示，应用excel统计软件进行t检验。判断样品组和对照组小 鼠生精细胞指标的差异显著性。 2．5精子畸形的细胞毒性检测 取受试小鼠双测附睾，置于载玻片，加入1—2滴PBS液，剪碎组织，用在光镜下观察。然后 用移液器吸取50山液体进行涂片，瑞士染液染色，用NikonTE2000—5荧光显微镜观察拍照。按 组和对照组小鼠精子畸形率的差异显著性。 2．6栅藻叶绿素的毒性检测 受试的斜生栅藻(Scenedes