Alpha-芋螺毒素TxID合成方法的优化.pdfVIP

第5卷 第2期 热 带 生 物 学 报 V01．5No．2 2014年 6月 JoURNAL 0F TRoPICALBIoLoGY Jun．2014 文章编号：1674—7054(2014)02—0107—04 Alpha一芋螺毒素 TxlD合成方法的优化 吴 勇，朱芙蓉，刘 倩，长孙东亭，罗素兰 (海南大学 热带生物资源教育部重点实验室／海I3市海洋药物重点实验室 ，海南 摘 要：在常规两步氧化法合成的基础上，对芋螺毒素TxlD第2对二硫键形成的条件进行了优化。优化条 件包括有无氮气保护、氧化试剂中碘的浓度、三氟乙酸 (TFA)含量、氧化时间等多个参数 ，研究其对TxlD氧 化折叠的影响。结果表明，氮气保护有利于TxlD的氧化折叠，碘浓度需5—10倍于巯基浓度，TFA含量对氧 化折叠影响不明显，氧化时间约 5min为宜。 关键词： 一芋螺毒素TxID；化学合成；碘氧化；优化；二硫键形成 中图分类号 ：Q179．4 文献标志码 ：A 芋螺毒素 (Conotoxin，CTx)是热带海洋中的肉食性软体动物——芋螺，分泌产生的一类用于捕食和防 御的神经毒素肽 ，其多样性高、活性强、能区分各种离子通道和受体的不同亚型。芋螺毒素已成为当今国 际生物药物研究的热点，其 中的Alpha(O／)家族芋螺毒素的半胱氨酸模式为 CC—C——C，且相对分子量 小，在芋螺体内广泛分布，是乙酰胆碱受体(nAChRs)各种亚型的选择性阻断剂的重要来源。芋螺毒素具 有巨大的潜在药用价值 ¨I2J，已有多种芋螺毒素进入临床研究。O／一芋螺毒素(—cTx)TxID是本实验室从 海南产织锦芋螺(Conustextile)中发现的，其序列结构如图1A所示，含有2对二硫键，属于 ／6型亚家 族，是迄今发现的a3 乙酰胆碱受体活性最强的特异阻断剂，其半阻断剂量 (IC∞)仅为 12．5nmol，具有 重要的研究和开发价值 。至今仅发现2个 3 nAChR亚型 一 的特异阻断剂，即本研究的O／．CTxTxlD和以前发现的 一cTx G c。SHPV9SAMSP’ AuIB 。O／．CTxTxID对 3 nAChR的阻断活性要 比AulB的 活性强60倍，是很难得的分子探针和先导药物。由于TxlD序 D 列中含有易氧化的甲硫氨酸(Met)，在化学合成过程中易被氧化 形成 甲硫氨酸亚砜 (图1B)，增加了合成难度，阻碍了对此芋螺 毒素的进一步深入研究和开发。特别是在采用常规的两步氧化 H 法形成第2对二硫键时，碘氧化过程中甲硫氨酸极易被氧化。 本研究通过优化TxlD合成过程中二硫键形成条件，以防止 甲硫 嘲 Ot一芋螺毒素 TxlD序列及二硫键连 氨酸被氧化，提高 ．CTxTxlD的合成效率，旨在获得足量的活性 接示意图(A)以及 甲硫氨酸氧化结 肽用于后续研究与开发 。 构示意图(B) 1 材料与方法 盹． 三二 一 1．1 材料 三氟乙酸(色谱级)购于阿拉丁试剂公司；乙腈 (色 conotoxinTxID；B·DiagramofMe’ 谱级)购于赛默飞世尔(中国)科技公司；甲酸、乙醚等均为国产 thi。nine。xidati。n 分析纯。全 自动多肽合成系统 ABI433，Waters2695高效液相色 amid砒edc00He丌ni“ 收稿 日期：2014—04—02 基金项目：国家国际科技合作专项 (2011DFR31210)；国家 自然科学基金；长江学者和创新团队发 展计划 (IRT1123)；海南省 自然科