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陡脉冲对恶性肿痛细胞杀伤效应的研究 陡脉冲对恶性肿瘤细胞杀伤效应的研究 姚陈果1。孙才新1廖瑞金1米彦1熊兰1胡丽娜2胡娅2 (1．重庆大学高电压与电工新技术教育部重点实验室，400044 2．重庆ra科大学第二附属医院，400061) 摘要；观察不同参数(频率、脉宽、峰值)组合的陡脉 此，在保证患者安全的前提下将适当的电脉冲引 冲屯场对恶性肿瘤细胞的杀伤效应。将癌细胞悬液3ml 入到癌症组织中，使恶性肿瘤细胞膜发生不可逆 盛于玻璃瓶中，每次施加不同参数组合的电脉冲20rain，性电击穿，这就破坏了肿瘤的生存条件，达到了 用Mrr法测细胞死亡率，并制作生长曲线；观察细胞 杀伤肿瘤细胞的目的。 的超徽结构变化。结果发现：不同参数组合的陡脉冲对 本文通过陡脉冲处理人卵巢腺癌细胞，对不 癌细胞的杀伤有较大影响，随着参数值的增大，细胞死 同剂量脉冲的杀伤效应进行了比较研究。 亡率上升，细胞的增殖受到抑制；实验组的细胞肿胀， 溶解性坏死，仅留细胞轮廓．细胞膜完整性破坏，线粒 1材料与方法 体空化、肿胀。 关键词：陡脉冲电场，恶性肿瘤，细胞膜， 1．1材料 不可逆性电击穿 (GIBcO)培养基培养。培养渡含10％d,牛血 近年来。脉冲电场的生物效应和治疗作用”’ 2‘^“越来越受到人们的重视。Weaver等p1发现给 100ug／ml链霉素。置于37℃、5％C02孵箱中培 细胞施加电脉冲将导致细胞膜出现微孔现象，当 养。实验时，将处于对数生长期贴壁生长的 电场取消后，在大多数情况下微孔会关闭而不会 sKOv3卵巢腺癌细胞用O．25％胰酶消化后离心， 对细胞造成任何影响，这个现象便称之为电穿 用RPMIl640培养液靠4成单细胞悬液，并校正细 孔，即可逆性电击穿。电穿孔采用的脉冲电场参 胞浓度至6．0×10／ml。 数一般为频率l,--4Hz、电场强度峰值l-2kV／cm、 1．2实验仪器 脉宽100螂、脉冲个数4--10个。电穿孔法采用 的电脉冲剂量比较小，只能导致细胞膜发生暂时 将实验组3ml盛于直径3mm、高5ram的玻 的可逆性电击穿，撤消电场后．细胞膜能运渐恢 璃瓶中．并通过自行研制的能量可控陡脉冲肿瘤 复原来的形态，细胞仍然存活。作者的实验结果 治疗仪的铂金电极(两针间距Icm)施加不同参 表明，随着电脉冲剂量的增加，细胞膜出现不可 数(频率、脉宽、峰值)组台陡脉冲(陡脉冲用 恢复的破裂导致细胞死亡．为此，我们把这种现 电容放电产生)。该仪器能产生电压峰值 象称作细胞的不可逆性电击穿。 细胞的基本结构[61是细胞膜、细胞质和细胞 独立可调的指数衰减波形，其脉冲陡度(上升沿) 核。细胞膜是包围在细胞质外周的一层界膜，又 90—180ns，从而实现陡脉冲的能量可控。实验组 称质膜。它将细胞质与外环境分隔开，构成一道 处理一次20min，对照组不处理。用美国 特殊的屏障．使细胞有一个相对独立而稳定的内 Tektronix