鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株在鸭胚成纤维细胞中形态发生的研究.pdfVIP

家禽传染病 整病毒颗粒，除了磷钨酸的染色背景之外，没有发现DEF宿主细胞的细胞器等杂质。多数病毒粒子直径大 nm。 小在150--200nlll；病毒芯髓具有很高电子致密度，多数病毒芯髓的直径在60nm左右．馒大可达80 可以观察到具有2个或3个核衣壳的成熟病毒粒子；还可以观察到具有5个核衣壳的成熟病毒粒子，此类 病毒粒子的直径可达300 农壳、皮层和囊膜结构。 3讨论 ， 度推测出DEV-CHv完全病毒在蔗糖中对应的浮密度范围在1．23g／em3—1．29g，c订之间。该结果与陈宏武 等ll J通过CsCI平衡密度梯度离心所测得的DEV浮密度为1．272g／cm’的结果较相近。 同上述研究结果相比，为了获取纯化后的DEV-CHv完全病毒粒子，本研究采用了适当标称孔径的超 滤膜将来自于宿主细胞的较大的细胞器和较小的蛋白质分子过滤除去。此后通过排阻层析依分子量差异对 被分离物进行分离的作用以及蔗糖密度梯度离心依密度差异对被分离物进行分离的作用对DEV．CHv进行 纯化，取得了理想的结果。 在DEV的纯化和负染电镜图谱方面，目前尚无可供参考借鉴的详细的研究报告，也没有已经发表出 来的电镜图谱可供参考对比。余克伦等I21描述了其纯化的鸭瘟病毒的形态：“病毒直径184nln，核衣壳直 径92nm，农壳内有着色致密的芯髓，直径为74am，农壳外包有明显的囊膜，还可见到多量的囊膜融合 的双病毒颗粒和4病毒颗粒”，本章所观察到的DEV-CHv病毒负染形态与之相比结果基本一致。而本研究 结果同疱疹病毒科其它成员如伪狂犬病毒负染图片【3，”、马疱疹病毒的负染图片p1以及牛疱疹病毒1型病毒 的负染图片141相比，在形态学方面也具有很大程度的相似性。 参考文献略 鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株在鸭胚成纤维细胞中形态发生的研究 郭宇飞，程安春，汪铭书，贾仁勇，文明 (动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心，四川雅安 625014) 发生融合的方式侵入宿主细胞；病毒在细胞核内完成病毒核酸的生成、核酸与衣壳的装配；病毒核衣壳通 过核膜～内质网膜系统从细胞核转运到内质网池中并在内质网池中得到皮层结构：获得了皮层的DEV核 农壳通过出芽方式释放到细胞空泡内得到囊膜结构后成为成熟病毒；细胞空泡内的成熟DEV可通过细胞 的胞吐作用被释放到细胞外，或在空泡破裂时被释放到细胞外。 关键词：鸭病毒性肠炎病毒：鸭胚成纤维细胞：形态发生；透射电子显微镜技术 1材料方法 津市华真特种化学试剂厂，25％浓度．进E1分装)；低熔点琼脂糖(Cambrex公司产品)。 1．2取样方法及时间：取已经完全适应了在鸭胚成纤维细胞(DEF)上生长的鸭病毒性肠炎病毒CH 770 第六扶全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 min、90min、160min、 强毒株(DEV-CHv)。接种到刚刚长成致密单层的DEF细胞单层上；在接毒后40 240rain分别取样，240 min后每隔4h取样一次，取样的同时用倒置显微镜对细胞单层的病变情况进行观 察。细胞病变明显后缩短取样时间为每隔3h取样一次，直至细胞病变达80％为止；同时取相应未接种 DEV-CHv的对照DEF，进行与实验组相同的处理。 1．3电镜样品的制备方法：将细胞瓶内的营养液弃去，用PBS将细胞表面清洗2次：加2．5％戊二醛 将细胞单层于4C固定2h；用橡皮刮将贴壁生长的细胞刮下．3000r／min离心3min：将细胞沉淀悬浮于2 ％低熔点琼脂糖后于37℃以5000 r／rain保温离心10min：待琼脂糖凝固后，将包埋于琼脂糖中的细胞沉淀 x l x 部分切成lmm mm1．5mm的小块；按常规方法11,2l进行1％锇酸后固定、丙酮梯度脱水、环氧树脂 观察。 2实验结果 表面时的情形，对该情形作