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黑素合成的信号传导途径 马来记魏少敏 上海家化联合股份有限公司科研部(上海保定路527号，200082) 在黑素合成过程中，黑素细胞的黑素小体中含有三个关键酶：酪氨酸酶、酪氨酸酶有关蛋白 同源，30—40％氨基酸一致。在这三种酶中，酪氨酸酶是最重要的一种限速酶，它在黑素合成通路中 三个区域：黑素小体内区域，黑素小体中的跨膜区域，和黑素小体外留在黑素细胞质的区域。酶的 大部分是在黑素小体内，只有10％、约30个氨基酸在黑素小体外的细胞质中。在功能上，酪氨酸酶 黑素小体内区域，是主要的功能区，但并非所有功能的所在。针对细胞质中的酪氨酸酶区域功能还 所知甚少。然而，在铂金致突变的小鼠中，酪氨酸酶至少有27个氨基酸丢失，均在酪氨酸酶细胞质 区域内，这时黑素合成量下降。提示，细胞质内的酪氨酸酶功能区域中，含有对黑素小体内酪氨酸 酶功能区域具有指导作用序列。最近研究表明，人类黑素细胞的酪氨酸酶胞浆内的494—498位点， 与酪氨酸酶功能调节信息通讯有关。 TRP-1的功能还存在着争论。推测它是一种低活性的酪氨酸酶，多巴色素的异构酶，酪氨酸羟 化酶，多巴氧化酶，或黑素小体的催化酶。最近研究表明，TRP．1通过稳定和，或形成酪氨酸酶的复 杂体影响酪氨酸酶的活性。TRP．2被认为是多巴色素异构酶。 早期分子和细胞生物学研究中，多数使用鼠类黑素细胞瘤细胞研究酪氨酸酶活性调节机制。这 些研究认为，巫磷酸腺苷(cAMP)信息传递途径在黑素合成中占有主要地位。尽管在开始时人类黑 素细胞的原代培养所要求的刺激或维持细胞生长的有丝分裂因子还不清楚，但在1980s对人类黑素 细胞原代培养成功以后，人类黑素细胞合成黑素的机制研究将成为现实。例如，佛波酯的使用，证 实是通过消耗黑素细胞内的堡白激酶￡(PKC)而降低酪氨酸酶的活性，而使用霍乱毒素或提高cAMP 试剂，才朦胧地知道人类黑素细胞原代培养是通过cAMP途径发挥作用。对于阐明黑素合成过程中 这些信号传导途径所起的作用，如何将黑素细胞PKC和cAMP维持在生理浓度范围内是至关重要。 黑素合成过程中cAMP和PKC途径 cAMP途径 很久以来，cAMP被认为是调节黑素合成过程中的一种重要角色。在鼠类黑素细胞瘤中，某些 cAMP)等能够诱导黑素合成。在这些黑素合成增加的 黄嘌呤(IBMX)和三丁酸cAMP(dibutyryl 过程中，伴随着酪氨酸酶mRNA、蛋白和活性的增加。然而，尽管在处理30分钟后出现cAMP增 加，但cAMP诱导酪氨酸酶活性增加的过程却是一种迟发性反应，需要几天的时间。 对于增加cAMP产生迟发性黑素合成反应，提出了这样一个问题：cAMP增加是否是在黑素合 黑素细胞瘤细胞中，通过转染PKI的表达，抑制Ⅱ．MSH诱导黑素合成，使黑素合成减少40～50％， 中，要求有cAMP依赖的PKA参与。然而，当cAMP信号传导途径功能正常时，如果黑素细胞膜 表面上的a-MSH受体发生突变，结果同样会导致皮肤颜色发生改变。 在鼠类黑素细胞瘸中，cAMP对酪氨酸酶的半衰期没有什么影响，但酪氨酸酶的基因表达却得 132 到了上调，mRNA增加。进一步研究证实，在酪氨酸酶基因表达过程中，微丘脑转录因子(MrrF) 表现在酪氨酸酶基因增强子区域。M．盒中的突变明显减少酪氨酸酶的基因表达。凝胶延迟试验表明 酶表达增加。在酪氨酸酶的增强子区域，没有发现与cA／ⅥIP有关元素(CRE)作用一致的观点。 在酪氨酸酶表达过程中，cAMP有关元素结合蛋白(CREB)的直接角色还存在着争议。然而， cAMP可能促进黑素合成过程中其它的一种或多种相关蛋白合成有关。例如，a．MSH诱导PKC—B 的蛋白含量增加，而PKC．B则通过磷酸激酶激活酪氨酸酶细胞质内区域。 为了提高细胞内cAMP水平，创造培养人类黑素细胞的最佳条件，使得阐明cAMP在黑素合成 过程中的作用变得越来越复杂。在缺少提高cAIVIP水平的因子时，如缺少胎牛垂体提取液、霍乱毒 素、二丁酸cAMP和，或耗尽PKC的因子等，细胞会趋向于死亡。然而，近年来通过对黑素细胞培 养基的精选，使人们在有限的范围内对黑素合成调节过程中cA／VIP信号传导途径的研究成为现实。 例如，在生长因子耗尽的状态下，n，MSH则表现为诱导黑素细胞增殖，酪氨酸酶活性以及蛋白水 平增高。