需氧发酵过程中流加H2O2对提高供氧及菌体代谢的影响.pdfVIP

需氧发酵过程中流加H：0：对提高供氧及菌体代谢的影响 李书良焦鹏曹竹安 (清华大学化工系生物化工研究所，北京，100084) 摘要： 本文首先介绍了需氧发酵过程中一些改善供氧的主要方法．并进一步论述了采用H202供 氧的优．置厦其与待境供氧的差别，在此基础上阐述了流加H：02对茼体生长．产物生成及茵体代谢的 影响． 关键词供氧H：0：细胞色素P450酶需氧发酵 在大部分的需氧发酵中，供氧通常是通过向发酵液通气来实现的。在某一临界细胞浓度时， 氧气供应不能满足细胞生长所需，成为细胞生长的限制基质，进而导致细胞密度和产品浓度较低 …。多数的需氧发酵均不同程度的存在这个问题。如能解决这一问题，便可以提高细胞浓度，延 长细胞最大比生长速率或最大产物生成速率的持续时闻，从而提高产品浓度。 在微生物需氧发酵过程中，氧气的传递速率主要取决于以下几个因素：搅拌速率、通气速率、 发酵液组成及流变性质，以及发酵过程中的操作温度、压力等。传统改善氧气供应的方法如下： ①增大搅拌速率：②提高氧气分压，使用纯氧通气：③提高罐压；④提高通气速率：@改进反应 器分布器及搅拌浆设计等。传统方法改善氧气传质主要是从反应器设计和操作以及提高氧气分压 等方面考虑．但由于氧气的低溶解度(在水中25～30C，8～10ppm)，以及机械和操作上的原因， 其操作范围有限，而且要增加运行费用及设备成本。 近年来出现了一些新的方法来改善发酵过程中的供氧问题，以提高细胞密度和产物浓度。这 些改善发酵过程中供氧的方法主要有以下几种： ①加入氧载体如：全氟碳：12”、正十二烷烃Ⅲ、豆油[”、硅油【61等，利用氧气在其中的溶解 度较高的特性，将它们引入发酵液，来降低传质阻力。 ②加入电子受体来代替氧气，如对苯配，维生紊l(3衍生物等Ⅱ8”。 ③通过基因克隆的方法将携带氧的基因如血红蛋白基因克隆到目的菌株。 ④利用化学或生物方法产生内源氧气，从分子水平上提高供氧。化学方法即向发酵液中加入 分子氧底物，如H：02，通过过氧化氢酶催化分解H：02产生氧气口““_”_”1。生物方法即采用与藻 类共培养的方法，建立一个人工共生体系，来提高供氧口4。“16】。 1采用H：O：供氧的优点 在发酵过程中采用H202供氧有很多优点： ①H：02供氧与通气供氧结合，适宜的H202流加浓度和方式可以提高发酵体系的细胞密度。 @Hp：可以在过氧化氢酶的催化下分解放出氧气，在反应不是非常剧烈的情况下．氧气将 直接以分子形式传给细胞，不会形成气．液传质阻力，提高了氧气的传质速率。 ③对于剪切力敏感及非常粘稠的发酵体系．H20：供氧提供了一种提高供氧的方法。 ④H：O：供氧还可能改变菌体的代谢途径，促进菌体利用更为有效的代谢途径来合成产物。G， Srirmu等人在用Xanthomonas 种更为有效的方式合成的【I“。 与加入氧载体来提高供氧的方法相比．加入H202具有对细胞毒性低、成本低、操作简单以 及不会为产物分离带来困难等优点．并且它的分解产物为水和氧气，不会形成污染。采用氧载体 来提高供氧不仅价格相对昂贵，而且通常会造成后续产物分离的困难。因此本文着重讨论在发酵 205 体系中流加H：q时．对供氧的改善及对菌体代谢的影响。 2用H：o：进行氧气供应与传统供氧方法的差别 通气供氧时，整个发酵体系是一个能够自我调节的系统。发酵液中氧气的平衡浓度是氧气吸 收速率和氧气消耗速率的函数。如果由于细胞呼吸速率的增加．溶氧值降低，氧气的吸收速率会 随之增加。氧气的浓度不会高于空气在水中的饱和值，而且由于这一浓度较低，也不可能对细胞 生长产生不利影响“u。 通过H202进行供氧时，整个发酵体系不是一个可以自我调节的系统。可能出现氧气局部浓 度过高的情形，会损害细胞。H：嘎的流加速度要能保持溶液中氧气浓度最适合细胞生长，并且 要使H：02不会对细胞产生毒害作用。在传统通气供氧时，通气同时起着两个作用，一是提供氧 气．其次是带走C02。在以H：O：进行供氧时，CO：及其它挥发性的代谢产物却不能带走，而CO： 会影响细胞代谢““。这一问题可咀通过采用与通气供氧结合得到解决。 3发酵体系中流加H202对菌体生长、产物生成的影响 采用H：O：供氧常常会对细胞产生损害，这除了H：02本身在一定浓度对细胞有损害作用外， 更多的是