转rhGCSF基因鱼腥藻的筛选及其生理特性研究.pdfVIP

t宁·土t 套国瘁耳生曲娃术与喀耳焉幡学术套议论文毒 2006．8．2-6 l的组装是必需的，Ycf4蛋 正确定位，从而使电子从可溶性的供体蛋白转移至P700(+)t61：Ycf3对Ps 白与高分子量的复合体相连，该复合体可能有助于PSI正确地插入类囊体膜pJ。这四个蛋白亚基都是 PS l反应中心与其它亚基或辅基连接的中间体，是反应中心与外界联系的桥梁，而由于各物种生活环 境的不同，各蛋白在进化上也出现较大差异。 从上述结果和讨论可见： 1．蓝藻和叶绿体共同含有的基因主要有7个；这些基因稳定地保留在光合器中。反映了它们的表达 和调控对PsJ结构及光能转化有重要意义：对光系统l基因的研究可以从此开始。 2．在这7个PS I基因中psaC、psaA和psaB在光合器长期进化中一直保持高度的同一性，反映了这 3个基因在Psl结构稳定与功能执行中的重要性。 ． 3．在多数情况下psaJ和ycf4的同源性在光合器进化中变化较大§反映了它们受遗传和环境的影响较 大，这也许提供了较大的可调节空间。 4．欲从基因水平上分析hTNF-o表达与PSI基因表达的影响，需测定转基因工程藻的基因组序列及 mRNA表达情况，本研究为进一步工作探索了目标。 转rhG-CSF基因鱼腥藻的筛选及其生理特性研究 李清艳’，陈翠丽2，李爽1，赵兴责1，宋东辉。，张越男1，邓元告1，施定基12‘ 讯作者 中的存在，并用酶联免疫方法测得转基因鱼腥藻7120．G-CSF中G．CSF蛋白最大表达量为总可溶性蛋 白的0．】006％．对转基因蓝藻的生长曲线，叶绿素含量和光合放氧量测定结果表明，rhG-CSF基因转 化蓝藻后，对蓝藻前中期的生长影响不大，但20天后生长速度下降，这时外源蛋白表达也达到最大值， 这有利于转基因藻的大规模培养． 关键词：人粒细胞篥落刺激因子，转基因量腥藻7120，G-CSF，G．csF蛋白表这量，先合放氧 随着近年来分子生物学的发展，蓝藻成为继大肠杆菌和酵母之后的新一代转外源基因的微生物表 达宿主．受到了广泛重视。自20世纪90年代以来，已有多个药物蛋白基因在蓝藻中得到表达Il。J。 粒细胞集落刺激因子(granulocytecolony-stimulating 主要用于治疗肿瘤患者园放疗、化疗引起的中性粒细胞减少症p“】。本文在成功构建转rhG．CSF基因鱼 腥藻pJ的基础上对转基因鱼腥藻进行进一步筛选。 基因工程法制药，需要具备两个条件，一是外源基因转化宿主细胞成功，并有效表达，这是生产基 因工程药物的基础；二是宿主细胞必须生长良好，才有可能进行规模培养，为工厂化生产提供足够的原 材料．降低生产成本；因此本研究还就转基因藻的生理学特性进行了一些研究。 1．材料和方法 1．1蓝藻品系野生型鱼腥藻7120“nabaena sp．PCC7120)来自法国巴斯德研究所；转基因鱼腥藻 712043．CSF由本实验室构建。 1．2培养基和培养条件野生型鱼腥藻7120．W(wide 源的BG．1 Sulfate， 简写为Neo)；30℃，130r／min在三角瓶中光照振荡培养；光照强度901amol／m2-S。 正宁-土哇 舍国瘁耳生格技术与喀痒焉格学术套议论文毒 2006．8．2-6 1．3主要试剂和仪器DHZ-032LR型大型光照恒温摇床，购白上海中能博彩生物科技有限公司： Dw，1型氧电极购自英国HansTech公司。 1．4转基因藻筛选转基因藻在含新霉素25mg／L，250mg，L的BG—l1培养基中交替培养。 增及酶切检测rhG-CSF基因在转基因蓝藻中的存在。 1．6转基因鱼腥藻总可溶性蛋自制各见文献IgI。 检测G《sF蛋白的含量。 1．8转基因对鱼腥藻生长影响及G-CSIF的表达见文献191。 1．9转基因对鱼腥藻光合和呼吸的影响见文献p】。 2．结果与讨论 2．1转基因鱼腥藻中目的基因PCR检测 经过高低浓度新霉素