钛种植体表面微弧氧化TiO2涂层和HATiO2复合涂层对成骨细胞生物学行为的影响.pdfVIP

钛种植体表面微弧氧化Tio：涂层和 HA／TiO：复合涂层对成骨细胞生物学行为的影响 马楚凡1李冬梅1蒋百灵2李均明2 1．第四军医大学口腔医学院修复科，陕西西安，710032} 2．西安理工大学材料学院，陕西西安，710048 关键词 口腔蠹学钛种植体微弧氧化生物改性 一、SI昌 纯钛及钛食金是目前瞒床上应用最广泛的植入橱料，但其生物最性差、缺乏骨诱导作用、与周羽组 织不存在强有力的亿学性绪合是种植领域一直未熊勰决的难题之一．同时．在生理环境巾及负载条件 下钛耐磨性较差，腐蚀比较严重，容易向机体释放金属离子，这些都严重她影响了钛种植体的临束成功 卑弗制约了种植术的广泛开展n]．由于与周围组织发生相互作用的首先是种植体的袭面，因此，如何通 建袭箍改性的方法，改善钛及其合金的耐磨性、醚腐蚀性，提高其生物活性，对促进种植体与骨缌织豹早 期结合，提高结合强度具有夔娶意义． 微孤氧化(Ini汀∞rc 和Ti等有色余属表面制备致密陶瓷氧化膜的新技术．这层陶瓷保护膜与纂俸的结合力强。使金属 的耐磨性、耐腐蚀憔、抗热冲击及绝缘性髭得到极大改薷(“．】．本课题组首先采用微弧氧化工艺，在 敬植人豺料表面形成了内层致密、雏层多孔、禽有梯度分布的钙／磷成分的Ti02陶瓷涂层，进一步利 性，又利带内层致密Ti毡层的抗腐蚀、抑制离子释放的作用来为钛种稹体表面生物跛性作尝试性 研究． 为，并通过激光扫描共聚焦显徽镜对成臂细腿在两种涂层表面的肌动蛋白表达、细胞形态进行了 观察． 二、实验方法 (一)实验材料 ·25· (二)试件的制备 以镀试件为阳极，不锈钢片为阴极。采用脉冲一直漉电溅对钍试件进行微弧氧化处理，分别在 备用． (三)细胞早期粘附的研究 lmL。予5％Cq、饱和湿度、37℃环境下培养．分别在细胞接种后4、8、12、16、20、24h后取出试样， 成单缨胞悬液，以细胞计数板计数。每十时闻点各组检澜三个试件，每珏计三次取平均值，计算细胞 贴附率。 细胞贴驸率=(贴壁细胞敷／接种细胞数)×(培养孔底面积／钛片面积)×loo％ (四)细胞增殖的研究 长测定oD值。采用MTT法纲胞计数标准曲线估算细胞密度． (五)碱性磷酸酶(ALP)活性溯定 细胞接种方法弱上，以矿化液培养(食右2雌ol／L磷酸甘油钠．50烬／mL维生索C，10 O．2％Triton 人100pL X—100，4℃过夜，然后每孔加人150弘L 统计学分柝．为排除增殖事不弼对ALP活戮的影晌，进行蠲下修正； 细胞平均ALP活性(0D值)一安测()D值／闷一时间细胞增殖掌。 (六)肌动蛋白(actin)直接免疫荧光袭色观察 骨生物柜容性． ·26· 三、结果 (一)24h内各实验组成骨细胞掳料表面附着鲒果 也表明随蓿培莽时阔的延长，各组闯贴附率的差异逐渐缩小，到24h时。各组的贴附率基拳=逡捌一皱。 圈l戚骨期翻在不嗣材料表两2t小时内的牯甜曲线 (二)细胞增殖研究结果 层无涂屡袭颓。 羽2不嘲时阃点成臂细胞枉各组试忭表瓣堪殖情况比较 (三)AI．P活性的表达 ·27· 图3不问时闻煮各实骏缎成骨细胞AlJ括性 (四)肌动蛋白(a“in)直接免疫荧光柒色观察结果 显示了整个细胞在材料表面的铺展形态。接种3h后，不同材料表面的细胞形态即表理出明显的差别． 如图4c所示．Ti如涂层袁丽的纲胞形态主要以铺展穗为主，可见多数纲胞呈梭形、三角形或近似赢方 形，边缘有弧度，多有伪足伸出．形态舒展。已基本具备体外成骨细胞的赡掇形态。胞浆内的肌动蛋自染 色清晰．沿细胞长轴方向向两极伸展，说明袁接种早期细胞即可附着在材辩交两并形成较好的铺晨． 伪足增多(豳4e)．而闷时阅无涂层钛表面的细胞形态仍以球体榉为主，腿浆内的肌动豢自丝尚未完全 打开·细胞