S腺苷蛋氨酸对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及胶原表达的影响研究.pdf

1．1 1．2 1．3 1．4 1．5 1．6 1．7 1．8 1．9 2 3 S一腺苷蛋氨酸对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞 增殖及胶原表达的影响 摘 要 fibrosis，HF)是各种慢性肝损伤向肝 目的：肝纤维化(hepatic 硬化发展的中间阶段，其发生与发展受多种因素调控，但其中心环节 stellate 是各种刺激因子诱导肝星状细胞(hepaticcells，HSCs)的活 matrix，ECM)， 化及增殖，并产生大量的细胞外基质(extracellular 沉积于肝组织中，进一步发展即形成肝硬化。因此，抑制HSCs的活 化与增殖、诱导其凋亡是阻止肝纤维化发生与发展的关键。S．腺苷蛋 苷蛋氨酸合成酶作用下催化合成的一种天然化合物，广泛存在于人体 各种组织和体液中，参与体内多种生化反应，是生物甲基化反应的必 需中间体，直接为甲基受体提供甲基。另外，SAM还可通过转硫作 对抗氧自由基及炎性物质对细胞的损伤。目前，外源性的SAM在临 床上主要被用于治疗各种病因引起的肝内胆汁淤积，其机制与SAM 提供甲基和转硫基作用相关。低甲基化状态与酒精性肝病引起的肝纤 维化有密切的关系，SAM作为生物甲基化的必需中间体，在理论上 有可能影响肝纤维化的过程。本研究旨在观察SAM对乙醛 以及I型矛UlII型胶原表达的影响，为SAM在临床上用于预防和治疗 肝纤维化提供理论依据。方法：体外培养大鼠肝星状细胞株 (HSC．T6)，将细胞分为空白对照组、乙醛对照组(200 lamol／L)、O．15 mmol／L mmol／LSAM+200AA)、0．5mmol／L SAM组(0．15 pmol／L mmol／LSAM+200 mmol／LSAM组(1．5 SAM组(O．5 l上mol／LAA)、1．5 mmol／LSAM+200AA)、5．0mmol／LSAM组(5．0mmol／L l_Imol／L SAM+200AA)、15．0mmol／LSAM组(15．0mmol／LSAM+ l上mol／L 200 光学显微镜观察细胞形态变化，MTT法检测细胞增殖。依据实验结 果，选择其中的两个剂量用于后续实验。将细胞分为空白对照组、乙 mmol／L mmol／L 醛对照组(200 SAM组(1．5 SAM+200 lamol／L)、1．5 AA)、5．0mmol／L mmol／LSAM+200 Itmol／L SAM组(5．0 lamol／L AA)，SAM干预培养1h后再加入乙醛，培养24h后采用反转录聚合 酶链式反应(Reverse chain transcriptionpolymerase 镜下见空白对照组HSC．T6细胞生长良好，呈梭形或星形。与对照组 比较，乙醛对照组细胞数目增多，排列密集，细胞间间隙更小，细胞 周边伪足更多更长，胞体呈星形或不规则形。与乙醛对照组比较， SAM干预培养的各组细胞数目减少，细胞间的间隙增大，细胞周边 伪足减少，细胞呈短梭型或扁平形，并随着SAM浓度的升高，此变 化更加明显。 2．M1vr法检测结果显示，空白对照组、乙醛对照组、 0．15mmol／LSAM组、O．5mmol／LSAM组、