S腺苷甲硫氨酸摇瓶发酵条件优化及其初步分离纯化研讨.pdf

on shakeflask StudyS--Adenosyl·-L·-methionine 1一 … 1●J● 11n n J● ●o 量。ermentatlOn乙OncIltlOnand上，reIraCtlonatlon Purification DissertationSubmittedto of NanjingUniversityTechnology in fulfillment of partial requirement forthe of degree MasterofE ngineering By YidanGuo Wan Supervisors：Prof．Honggui June2008 摘 要 然物质，它既可作为疾病治疗药物，又可作为食品营养强化剂的物质，可用于治 疗肝病、肝硬化所致的胆汁郁积、抑郁症，对各种关节炎和关节损伤疗效显著， 也是抗衰老的高级保健药物。本论文利用巴斯德毕赤酵母基因工程菌发酵产 SAM，对其摇瓶发酵条件进行了优化，在此基础上利用离子交换树脂对SAM的 下游工艺的分离纯化做了初步研究。 利用HPLC．UV法测定发酵液中S．腺苷甲硫氨酸。色谱条件为PrevailC18柱， 流速为1．0mL／min；紫外检测器的检测波长为254nm。S．腺苷甲硫氨酸在 确性高、重复性好，适合于S．腺苷甲硫氨酸的定量分析。 通过研究不同发酵条件对S．腺苷甲硫氨酸发酵的影响，获得了最佳摇瓶分 批发酵培养条件：种龄24h；接种量10％1装液量50mL／500mL三角瓶；发酵 5．81摇瓶转速为220r／min；发酵温度为30℃，发酵周期为72h。 培养基初始pH 利用单因素实验优化了摇瓶分批发酵培养基的最佳组成为(g／L)：甘油60，磷 14．9，KOH 4mL， 酸(85％)26．7mL，CaS04 4．13，PTMI 0．93，K2S0418．0，MgS04 6．0，K1 0．08，MnS04 28％氨水调pHi121℃高压灭菌30min。PTMl(g／L)：CuS04 20．0，FeS04·7H2065．0，钼酸钠O．2，硼酸O．2，生物素0．2， 3．0，CoCl2O．5，ZnCl2 硫酸5mL；过滤除菌。609／L甘油浓度的培养基中甲醇的最佳诱导量为0．30％。 最佳L．甲硫氨酸加入量为Sg／L，采用在发酵培养24小时后一次性加入的方式为 最佳。 对毕赤酵母细胞采用20％--氯乙酸化学渗透法破碎提取S．腺苷甲硫氨酸，研 究得SAM在pH--2，温度为lO℃时稳定性最好。 通过对不同离子交换树脂分离SAM的研究，确定了一种分离效果较理想的 树脂——Ⅸ006，通过研究此树脂对S．腺苷甲硫氨酸的静态吸附条件，并在离子 交换柱上对S．腺苷甲硫氨酸吸附、洗脱条件进行了部分研究。确定了离子交换 树脂JK006对S．腺苷甲硫氨酸的静