大鼠乳腺组织石蜡切片的制作.docVIP

精品论文 参考文献 大鼠乳腺组织石蜡切片的制作 刘一飞1 张彬2* （1内蒙古民族大学蒙医药学院 内蒙古通辽 028000；2内蒙古民族大学附属医院 内蒙古通辽 028000） 【中图分类号】R361.2 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）04-0193-01 大鼠乳腺组织HE染色，是关于大鼠乳腺方面的实验研究的一项简单而又常用的检测指标，而大鼠乳腺因其体积较小，肉眼观察难以与其周围组织区分，加上乳腺组织富含大量脂肪和结缔组织，难以完全脱水，为大鼠乳腺组织的病理切片制作带来了一定的困难。笔者在实验中自我摸索总结了一些制做大鼠乳腺组织石蜡切片的方法，效果良好。 现报道如下： 1 材料 成年雌性大鼠，10%中性甲醛，80%酒精，90%酒精,95%酒精，无水酒精，二甲苯，切片石蜡 2 方法 2.1取材 麻醉动物，去毛，取大鼠乳头周围1cm左右的组织 2.2固定 10%中性甲醛中固定24小时，流水冲洗组织30分钟 2.3 修剪组织 固定后的大鼠乳腺较固定前容易区分乳腺组织，可修剪出一个大约0.3cm*0.3cm*0.3cm大小的组织块 2.4脱水，透明 80%乙醇1小时rarr; 90%乙醇小时rarr; 95%乙醇过夜rarr;无水乙醇I 1小时rarr;无水乙醇II 1小时rarr;二甲苯I 0.5小时rarr;二甲苯II 0.5小时浸润石蜡I 1小时rarr; 浸润石蜡II 3小时 2.5 包埋、 切片、展片 如需观测乳腺导管走行则立面，如需观察乳腺小叶则平埋 切片厚度 为4um—5um，于43℃水中展片，捞片。 2.6染色 切片后放入60℃烘干箱内1小时rarr;放入二甲苯I中脱蜡15 minrarr;放入二甲苯II中脱蜡15minrarr;无水乙醇10分钟rarr;95%乙醇2分钟rarr;90乙醇2minrarr;85%乙醇2分钟rarr;自来水冲洗2分钟rarr;苏木精10min，取出自来水冲洗2min；入盐酸乙醇分化5s，自来水冲洗2 min；入伊红1分钟，自来水冲洗1min；入梯度乙醇80%酒精1分钟rarr;90%酒精1分钟rarr;95%酒精1分钟rarr;100%酒精2分钟；入二甲苯Ⅰ15分钟rarr;二甲苯Ⅱ15分钟，中性树胶封片。 3 结果 制片效果良的好，切片完整易切，平整不脱片，结构清晰透明，核质着色良好。镜下观察：组织结构完整，细胞形态清晰，着色均匀。 4 讨论 4.1 取材是决定制作病理切片好坏的重要因素之一，大鼠乳腺体积较小与周围组织连接紧密，取材时应轻柔，不要暴力取材以免过度牵拉撕扯组织。 4.2 组织离体后应尽快固定，固定时间不宜过久可根据组织大小与室温调整时间，以免组织变硬。脱水后要进行水洗，冲洗中性甲醛液，水洗不彻底会导致脱片及染色过浅。 4.3 同一批次制作的组织，在固定后修剪组织时应按统一大小进行修剪，以免影响之后的脱水，透明，浸 蜡。 4.4 脱水是制作病理切片最关键一步，石蜡可溶于二甲苯中，不容于水中，组织固定及冲洗后组织内含有大量水分，为使浸蜡成功就必须严格把握脱水过程。笔者建议95%酒精过夜而不建议采用无水酒精过夜，组织在无水酒精中过久可导致脱水过度，组织变脆，不利于切片。脱水所用梯度酒精应经常更换新液，保证脱水质量，脱水，透明及浸蜡时间应严格把握。如需保存组织可在80%酒精中暂时保存。浸蜡温度应保持60度恒定，不可过高或过低，以免导致组织烧毁或浸蜡不足。 4.5 捞片后应与60度烘干箱内烘片1小时，使组织与载玻片更牢固的贴附在一起防止脱片，建议时候涂有防脱液的载玻片。染色所用试剂均应经常更换新液去出杂质。在苏木精中的时间可更具燃料的新旧及室温来调整。苏木精染色后可与显微镜下观察细胞核染色深度，如染色不足可延长染色时间，如染色过度可延长在盐酸乙醇中的时间。 参 考 文 献 [1]赵荧，唐军民.《形态学实验技术》，北京大学医学出版社，2008-8-1. [2]路健,王伶.石蜡切片制作中的问题与解决，基础医学教育，2001,3（3），263. [3]周显，张艳.乳腺组织切片的改良方法，河南医学. [4]高宝红.介绍大鼠各组织器官石蜡切片制作法，实用医技杂志，2009 12 （12），1023—1024.