Taura综合症病毒分子流行病学初步研讨.pdf

福建覆n 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 Taura综合症病毒分子流行病学初步研究 袁军法张聪王建民李莉娟石正丽水 (’中科院武汉病毒研究所分子病毒学重点实验室湖北武汉430071) 后进行序列测定和分析，旨在调查该病毒在我国的感染现状及其分离株的基因变异特征。结 果显示TSV感染率为12．7％，发病池塘病毒感染率为100％，说明该病毒在我国分布较广。 近。 关键词：Taura综合症病毒；结构蛋白；流行病学 Taura综合症病毒(TauraVrirus，TSV)是感染对虾的主要病毒，在我国分布 Syndrome 广泛并导致一定规模的流行，给对虾养殖业造成严重的经济损失Taura综合症病毒(Taura Syndrome vannamei)体内发现以米，很快被传播剑北美、南Ⅱ，赢剑现在也是南美白对虾养殖业中最 为严重的病毒病原川。感染病毒的对虾临床表现为尾部及附肢发红，甲壳软化，表皮角质层 出现黑色斑点等特征，因此这类病害通常称为“红尾病”或“黑斑病”。Taura综合症病毒是一种 1 21。 测定，为10，205个核苷酸的单链正义RNA 现有的研究表明，TSV在不同的地区存在不同的分离株。从现有的序列信息来看，不同 的分离株变异主要在编码病毒主要结构蛋白的ORF2上，其聚类分析表明可以分为三个分支， 而缺乏在我国养殖地区的病毒分离株信息。我国是对虾养殖火国，养殖范围广泛，并且引种 途径厂+泛。本文通过筛夯我国不同养殖地区的对虾样品，选择扩增ORF2后进行序列测定利 分析，旨在调奄该病毒在我国的感染现状及其分离株的基因变异特征，筛选在我国分布的病 毒分离株独特的基冈标记，为病毒的防治提供基础资料。 1材料与方法 1．1核酸、菌株与质粒 TSV克隆所需核酸以组织提取的总RNA为米源，对虾样品分别采自J“东中山、顺德、 珠海，浙江温岭和海南海口。部分样品采白发病池塘，其余为随机采样。每一地方样品采样 福建覆n’ 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19—23 25--30只虾，均为活体取虾鳃后一80℃冻存备用。1 兜隆载体为pGEM·T 1．2酶类及试剂 DNA聚合酶均为TaKaRa TaqDNA聚合酶、NTP购白Biostar，限制性内切酶和ExTaq 公司产品，T4 DNA连接酶为Roche公司产品，TRIzol购白lnvitrogen。 1．3引物设计 003005)序列，利用引物设计软件 根据Genebank登录的TSV基冈组．(序列号：NC Primerselect设计引物，分别没计检测引物和基因扩增引物，由上海博亚生物技术有限公司 合成，引物序列信息详见表1。 表1引物列表 1．4样品筛查 5x 缓冲液、轧I RNA酶抑制剂和200U dNTP(10raM)、25U DEPC处理的双蒸水至总体积为25¨I。42*(2温浴1h，产物直接用作PCR扩增的模极。 扩增反应体系与条件：在50川体系中，以雄I的逆转录产物为模板，分别以特异引物 l 斤取5uPCR产物66在1．0％琼脂糖凝胶中电泳检测。 1．5基因扩增与克隆 游引物TSVR3，70*(2温浴5min，立即冰浴5min后依次加入轧l的M．MLV5x缓冲液、轧I RNA酶抑制剂和200U dNTP(10mM)、25U author