中国海洋大学研究生高级生化往年试卷.docVIP

名词解释 1.蛋白质工程：2.人源化抗体3.排阻4.凝胶过滤层析5.亲和标记 二．问答题 1.如何制备抗体酶？抗体酶制备过程中要解决的关键问题是什么？ 抗体酶的制备主要包括下列3个步骤： ① 分析某种化学反应的过渡态结构，合成稳定的过渡态类似物作为抗原或半抗原。 ② 免疫动物，产生抗体。 ③ 筛选抗体，分离出具有催化功能的抗体，即抗体酶。 对于这个设想有两个要解决的关键问题。 一是正确设计并合成化学反应过渡态的稳定的类似物。 二是对产生的抗体酶的选择。 2.在电泳过程中影响蛋白质泳动速度的因素有哪些？有何影响？ 其余见ppt 3.欲从卵清中分离纯化卵清蛋白，请你设计实验过程。1，取两只新鲜鸡蛋，得蛋清50ml，置于烧杯中，外用温水浴25－30，在不断搅拌条件下，缓慢加入等体积得三氯乙酸－丙酮（1:2V/V），立即出现大量白色絮状沉淀，加完后最终PH约3.5，再继续搅拌30min，然后在4冰箱中放置过夜。2,次日用布氏漏斗抽滤，得黄绿色清液。3，边搅拌边加入4预冷的丙酮200ml沉淀蛋白，在4放置2h之后将上清液小心倒入瓶中回收，下部沉淀部分于4000rpm离心5min，收集沉淀。4，将沉淀溶于10ml无离子水中，对无离子水（50倍）透析4h，换水两次，再对碳酸钠缓冲液透析过夜，4000rpm离心10min ,去除不溶物。 总活力的回收：表示提纯过程中酶的损失情况。通过活力测定，检测酶在 比活力的计算: 可以了解酶的提纯倍数及判断纯化方法的优劣及有效程度。 5.核酶是如何发现的，核酶的发现有何意义。 1982年Cech发现四膜虫的26SrRNA前体在没有蛋白质的情况下，进行内含子的自我剪接，形成了成熟的rRNA，证明有的RNA分子也具有催化活性，并提出核酶(ribozyme)这个词。 1983年，Altman和Pace又分别报道了Rnase P对大肠杆菌tRNA前体的加工。Rnase P由80%的RNA和20%的蛋白质组成，为了弄清RNA部分的作用，他们采用酚抽提，加入蛋白酶来处理这个酶，而且在反应体系中加入0.1%的SDS，在这种情况下，提高Mg2+浓度，RNA部分仍具有和全酶同样的催化活性，又一次证明RNA具有酶的活性。 1984年Apirion等研究了噬菌体T4 RNA，证明了在没有蛋白质的参与下能自我断裂。 6.请全面分析一下酶学研究在实践中有哪些应用 7.简述化学修饰法研究酶活性中心的方法和原理 8. D-Glc在水溶液中旋光度如何变化？怎样制备α-D-Glc和β-D-Glc？ D-Glc有α-D-Glc和β-D-Glc两种结构，在水溶液中异头物通过直链形式可以互变，产生变旋现象，最终达到平衡，溶液的比旋值达到一恒定值+52.6度 从低于30℃的乙醇中结晶，可以得到α-D-Glc [α]20D+112.2度 从98℃吡啶中结晶可以得到β-D-Glc [β]20D +18.7度 2 举出三个以上例子说明你对寡糖的理解，如何认识糖链结构和功能的多样性 寡糖是由2-20个分子的单糖缩合而成的糖。 一、二糖： 与日常生活密切相关的二糖有蔗糖、麦芽糖和乳糖。 1、麦芽糖(maltose)： 淀粉的水解产物。谷类的种子发芽时及在消化道中被淀粉酶水解即产生麦芽糖。 民间常用大麦芽其中含有淀粉酶使淀粉水解变成麦芽糖。 二分子的葡萄糖α-D-G和α-D-G缩水按α （1-4）形成糖苷键 2、蔗糖(sucrose)：日常食用的糖主要是蔗糖。甘蔗、甜菜、胡萝卜和有甜味的果实（香蕉、菠萝等）都含有蔗糖 1）化学性质：无游离醛基、不具还原性。 2）物理性质：溶于水、甜度高。 3、乳糖(lactose)：由乳腺产生存在于人和动物的乳汁内。牛乳含有10%；人乳含有5-7% 乳糖是由α-D-G和β-D-L各一分子按β（1-4）糖苷键缩合失水形成的。 4、纤维二糖(cellobiose)：是纤维素的基本结构单位。迅两分子的葡萄糖按β（1-4）键型相连而成。 二、三糖： 棉籽糖(raffinose)，见于多种植物，尤其是棉籽甜菜中。于酸性共热时，棉子糖即水解生成葡萄糖和果糖 各一分子。 棉籽糖蔗糖酶果糖+蜜二糖 棉籽糖半乳糖苷酶半乳糖+蔗糖 ABO血型的本质区别，血型转换的实现是否可行？解释之 A、B、O三种血型抗原的糖链结构基本相同，只是糖链末端的糖基有所不同。A型血的糖链末端为N-乙酰半乳糖，B型血为半乳糖，O型血则缺少这两种糖基。 血型（blood groups；blood types）是以血液抗原形式表现出来的一种遗传性状。 狭义地讲，血型专指红细胞抗原在个体间的差异；但现已知道除红细胞外，在白细胞、血小板乃至某些血浆蛋白，个体之间也存在着抗原差异。因此，广义的血型应包括血液各成分的抗